农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2004年
2期
170-174
,共5页
任立明%邹贤刚%Marianne Brüggemann
任立明%鄒賢剛%Marianne Brüggemann
임립명%추현강%Marianne Brüggemann
酵母人工染色体(YAC)%His.5基因%Ura3基因%同源重组%置换型载体
酵母人工染色體(YAC)%His.5基因%Ura3基因%同源重組%置換型載體
효모인공염색체(YAC)%His.5기인%Ura3기인%동원중조%치환형재체
人工酵母染色体(YAC)可以克隆和分析大片段的染色体DNA,并且可以分离那些在大肠杆菌(Escherichia coli)中不可能得到的序列.实验将His.5基因插入到一个Ura3基因的中间,构建了一个新的质粒pLRH33,从而打断了Ura3基因使之不能表达.利用His.5基因两端各留下的部分Ura3基因片段,同源重组到YAC臂上原有的Ura3基因中,使重组后的YAC的标记性状从Ura+ His-变成了His+Ura.用质粒pLRH33的5.5kb线性片段以一定比例和需要重组到YAC上的目的基因pBAC300的50kb片段相混合,同时作酵母菌转化,在His-Ura+培养基上得到大量带His5基因的阳性克隆.在检测的1 200个克隆中,有250个目的基因阳性克隆,占受检克隆的22.5%.表明质粒pLRH33可以有效地用作YAC重组的筛选标记.
人工酵母染色體(YAC)可以剋隆和分析大片段的染色體DNA,併且可以分離那些在大腸桿菌(Escherichia coli)中不可能得到的序列.實驗將His.5基因插入到一箇Ura3基因的中間,構建瞭一箇新的質粒pLRH33,從而打斷瞭Ura3基因使之不能錶達.利用His.5基因兩耑各留下的部分Ura3基因片段,同源重組到YAC臂上原有的Ura3基因中,使重組後的YAC的標記性狀從Ura+ His-變成瞭His+Ura.用質粒pLRH33的5.5kb線性片段以一定比例和需要重組到YAC上的目的基因pBAC300的50kb片段相混閤,同時作酵母菌轉化,在His-Ura+培養基上得到大量帶His5基因的暘性剋隆.在檢測的1 200箇剋隆中,有250箇目的基因暘性剋隆,佔受檢剋隆的22.5%.錶明質粒pLRH33可以有效地用作YAC重組的篩選標記.
인공효모염색체(YAC)가이극륭화분석대편단적염색체DNA,병차가이분리나사재대장간균(Escherichia coli)중불가능득도적서렬.실험장His.5기인삽입도일개Ura3기인적중간,구건료일개신적질립pLRH33,종이타단료Ura3기인사지불능표체.이용His.5기인량단각류하적부분Ura3기인편단,동원중조도YAC비상원유적Ura3기인중,사중조후적YAC적표기성상종Ura+ His-변성료His+Ura.용질립pLRH33적5.5kb선성편단이일정비례화수요중조도YAC상적목적기인pBAC300적50kb편단상혼합,동시작효모균전화,재His-Ura+배양기상득도대량대His5기인적양성극륭.재검측적1 200개극륭중,유250개목적기인양성극륭,점수검극륭적22.5%.표명질립pLRH33가이유효지용작YAC중조적사선표기.
