动物学研究
動物學研究
동물학연구
ZOOLOGICAL RESEARCH
2003年
3期
173-179
,共7页
李常健%刘军%石耀华%杨书婷%桂建芳
李常健%劉軍%石耀華%楊書婷%桂建芳
리상건%류군%석요화%양서정%계건방
彩鲫%Ran%克隆%表达%抗体
綵鯽%Ran%剋隆%錶達%抗體
채즉%Ran%극륭%표체%항체
根据Ran的保守区序列设计简并引物,结合SMART cDNA合成及RACE-PCR技术,克隆到彩鲫(Carassius auratus color variety)的Ran基因的cDNA全长,其编码区全长为648bp,编码215个氨基酸.采用BLAST程序在NCBI数据库中对其进行同源基因搜索,结果表明,其推测的编码氨基酸序列与斑马鱼和鲑鱼的Ran基因编码的氨基酸序列的同源性分别高达98%和97%.还对其编码区全长序列进行了原核表达,以经纯化的表达蛋白免疫家兔,制备出了具有较高特异性的多克隆抗体.采用Western blotting进行的组织特异性分析表明,Ran蛋白在卵巢、精巢和肾中表达,在心、脑、肝、脾和肌肉中不表达.本工作为采用免疫耗竭法、免疫共沉淀、体外系统模拟等方法进一步研究鱼类Ran基因的生理功能及分离鉴定其结合蛋白提供了良好基础.
根據Ran的保守區序列設計簡併引物,結閤SMART cDNA閤成及RACE-PCR技術,剋隆到綵鯽(Carassius auratus color variety)的Ran基因的cDNA全長,其編碼區全長為648bp,編碼215箇氨基痠.採用BLAST程序在NCBI數據庫中對其進行同源基因搜索,結果錶明,其推測的編碼氨基痠序列與斑馬魚和鮭魚的Ran基因編碼的氨基痠序列的同源性分彆高達98%和97%.還對其編碼區全長序列進行瞭原覈錶達,以經純化的錶達蛋白免疫傢兔,製備齣瞭具有較高特異性的多剋隆抗體.採用Western blotting進行的組織特異性分析錶明,Ran蛋白在卵巢、精巢和腎中錶達,在心、腦、肝、脾和肌肉中不錶達.本工作為採用免疫耗竭法、免疫共沉澱、體外繫統模擬等方法進一步研究魚類Ran基因的生理功能及分離鑒定其結閤蛋白提供瞭良好基礎.
근거Ran적보수구서렬설계간병인물,결합SMART cDNA합성급RACE-PCR기술,극륭도채즉(Carassius auratus color variety)적Ran기인적cDNA전장,기편마구전장위648bp,편마215개안기산.채용BLAST정서재NCBI수거고중대기진행동원기인수색,결과표명,기추측적편마안기산서렬여반마어화해어적Ran기인편마적안기산서렬적동원성분별고체98%화97%.환대기편마구전장서렬진행료원핵표체,이경순화적표체단백면역가토,제비출료구유교고특이성적다극륭항체.채용Western blotting진행적조직특이성분석표명,Ran단백재란소、정소화신중표체,재심、뇌、간、비화기육중불표체.본공작위채용면역모갈법、면역공침정、체외계통모의등방법진일보연구어류Ran기인적생리공능급분리감정기결합단백제공료량호기출.
