中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
3期
293-298
,共6页
陆纲%宫明%贾弘禔%陈瑞华%邵世滨
陸綱%宮明%賈弘禔%陳瑞華%邵世濱
륙강%궁명%가홍제%진서화%소세빈
去极化%Ca2+内流%PKC%转位
去極化%Ca2+內流%PKC%轉位
거겁화%Ca2+내류%PKC%전위
为观察胞外Ca2+内流和肌浆网Ca2+释放两种来源的Ca2+对cPKCα转位激活的影响，揭示PKC在去极化-nAChR转录偶联中的作用，构建了pPKCα-EGFP-N1融合蛋白真核基因表达载体.转染C2C12肌细胞后，采用激光共聚焦显微镜记录了KC1或咖啡因处理所引起的细胞Ca2+波变化及PKCα-GFP融合蛋白在细胞内的分布.结果提示，只有用KC1处理引起细胞膜去极化时，伴随Ca2+内流，才能观察到PKCα-GFP绿色荧光在细胞内发生的细胞浆至细胞膜分布变化.然而，采用肌浆网Ca2+通道激动剂咖啡因刺激肌细胞，使肌浆网中Ca2+释放，未见PKCα-GFP绿色荧光在浆、膜分布发生任何变化.结果提示，去极化时外Ca2+内流可引起PKCα转位激活，肌浆网Ca2+释放对PKCα的转位激活没有影响.
為觀察胞外Ca2+內流和肌漿網Ca2+釋放兩種來源的Ca2+對cPKCα轉位激活的影響，揭示PKC在去極化-nAChR轉錄偶聯中的作用，構建瞭pPKCα-EGFP-N1融閤蛋白真覈基因錶達載體.轉染C2C12肌細胞後，採用激光共聚焦顯微鏡記錄瞭KC1或咖啡因處理所引起的細胞Ca2+波變化及PKCα-GFP融閤蛋白在細胞內的分佈.結果提示，隻有用KC1處理引起細胞膜去極化時，伴隨Ca2+內流，纔能觀察到PKCα-GFP綠色熒光在細胞內髮生的細胞漿至細胞膜分佈變化.然而，採用肌漿網Ca2+通道激動劑咖啡因刺激肌細胞，使肌漿網中Ca2+釋放，未見PKCα-GFP綠色熒光在漿、膜分佈髮生任何變化.結果提示，去極化時外Ca2+內流可引起PKCα轉位激活，肌漿網Ca2+釋放對PKCα的轉位激活沒有影響.
위관찰포외Ca2+내류화기장망Ca2+석방량충래원적Ca2+대cPKCα전위격활적영향，게시PKC재거겁화-nAChR전록우련중적작용，구건료pPKCα-EGFP-N1융합단백진핵기인표체재체.전염C2C12기세포후，채용격광공취초현미경기록료KC1혹가배인처리소인기적세포Ca2+파변화급PKCα-GFP융합단백재세포내적분포.결과제시，지유용KC1처리인기세포막거겁화시，반수Ca2+내류，재능관찰도PKCα-GFP록색형광재세포내발생적세포장지세포막분포변화.연이，채용기장망Ca2+통도격동제가배인자격기세포，사기장망중Ca2+석방，미견PKCα-GFP록색형광재장、막분포발생임하변화.결과제시，거겁화시외Ca2+내류가인기PKCα전위격활，기장망Ca2+석방대PKCα적전위격활몰유영향.
