中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2003年
1期
24-30
,共7页
戴冰冰%梅文瀚%王家敏%钱关祥%卢健
戴冰冰%梅文瀚%王傢敏%錢關祥%盧健
대빙빙%매문한%왕가민%전관상%로건
核骨架基质结合区%逆转录病毒载体%基因沉默
覈骨架基質結閤區%逆轉錄病毒載體%基因沉默
핵골가기질결합구%역전록병독재체%기인침묵
为减轻逆转录病毒介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒MFG载体介导的转移基因的表达,将人β-INF基因上游800 bp的核骨架基质结合区(S/MAR)分别反向和正向克隆至MFG载体3′LTR上游,以egfp为报告基因观察S/MAR对egfp基因表达水平以及对病毒滴度的影响.结果显示:反向和正向的S/MAR在瞬时表达的情况都不能提高egfp的表达,但在稳定整合的情况下反向S/MAR可明显提高egfp在NIH3T3细胞内的表达,而正向的S/MAR作用不明显,另外反向S/MAR可明显提高MFG逆转录病毒载体的滴度约5倍;因此改造后的MFG逆转录病毒载体将能更好地用来介导外源治疗基因的表达.同时还观察到,同一个载体骨架在稳定表达的情况下,磷酸钙介导较逆转录病毒载体介导的表达水平高.提示逆转录病毒的生活史可能参与其介导的外源基因的沉默.
為減輕逆轉錄病毒介導的外源基因的沉默,進一步提高逆轉錄病毒MFG載體介導的轉移基因的錶達,將人β-INF基因上遊800 bp的覈骨架基質結閤區(S/MAR)分彆反嚮和正嚮剋隆至MFG載體3′LTR上遊,以egfp為報告基因觀察S/MAR對egfp基因錶達水平以及對病毒滴度的影響.結果顯示:反嚮和正嚮的S/MAR在瞬時錶達的情況都不能提高egfp的錶達,但在穩定整閤的情況下反嚮S/MAR可明顯提高egfp在NIH3T3細胞內的錶達,而正嚮的S/MAR作用不明顯,另外反嚮S/MAR可明顯提高MFG逆轉錄病毒載體的滴度約5倍;因此改造後的MFG逆轉錄病毒載體將能更好地用來介導外源治療基因的錶達.同時還觀察到,同一箇載體骨架在穩定錶達的情況下,燐痠鈣介導較逆轉錄病毒載體介導的錶達水平高.提示逆轉錄病毒的生活史可能參與其介導的外源基因的沉默.
위감경역전록병독개도적외원기인적침묵,진일보제고역전록병독MFG재체개도적전이기인적표체,장인β-INF기인상유800 bp적핵골가기질결합구(S/MAR)분별반향화정향극륭지MFG재체3′LTR상유,이egfp위보고기인관찰S/MAR대egfp기인표체수평이급대병독적도적영향.결과현시:반향화정향적S/MAR재순시표체적정황도불능제고egfp적표체,단재은정정합적정황하반향S/MAR가명현제고egfp재NIH3T3세포내적표체,이정향적S/MAR작용불명현,령외반향S/MAR가명현제고MFG역전록병독재체적적도약5배;인차개조후적MFG역전록병독재체장능경호지용래개도외원치료기인적표체.동시환관찰도,동일개재체골가재은정표체적정황하,린산개개도교역전록병독재체개도적표체수평고.제시역전록병독적생활사가능삼여기개도적외원기인적침묵.
