CAJ | 학술논문

目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞表型转换的影响,确认体外培养的血管平滑肌细胞不同表型的最佳指标.方法选择以未经培养传代的血管平滑肌细胞和体外培养的第4代血管平滑肌细胞作对比研究,采用免疫组织化学法检测血管平滑肌细胞α肌动蛋白,逆转录聚合酶链反应检测血管平滑肌细胞肌动蛋白22α、基质γ-羧基谷氨酸蛋白和骨桥蛋白各目的基因mRNA相对表达水平,透射电镜观察血管平滑肌细胞的形态学特征,确定其表型转换特征及各表型指标的区分效能.结果电镜观察显示,未经培养传代的血管平滑肌细胞胞质中肌丝分布丰富、均匀,并可见到收缩表型血管平滑肌细胞的典型结构-密斑,内质网、高尔基复合体等细胞器相对较少;而体外培养至第4代时血管平滑肌细胞胞质中肌丝明显减少,内质网、高尔基复合体明显增多.原代血管平滑肌细胞α肌动蛋白免疫组织化学染色强且广泛,而体外培养至第4代时α肌动蛋白染色明显变浅、稀疏.第4代血管平滑肌细胞的骨桥蛋白mRNA表达量较原代血管平滑肌细胞显著增高(P<0.01),肌动蛋白22α mRNA在血管平滑肌细胞中的表达量较原始血管平滑肌细胞降低,但差异不大,基质γ-羧基谷氨酸蛋白mRNA表达量较未经培养传代的血管平滑肌细胞升高(P<0.05).结论血管平滑肌细胞体外培养至第4代,即可从典型的收缩表型转化为合成表型,提示血管平滑肌细胞是一种很容易去分化的细胞.电镜形态观察α肌动蛋白和骨桥蛋白在两型血管平滑肌细胞中的差异,可作为血管平滑肌细胞表型区分的有效标志.而肌动蛋白22α和基质γ-羧基谷氨酸蛋白的表达在两型血管平滑肌细胞中虽有一定的差异,但重叠较大.
목적 탐토체외전대배양대혈관평활기세포표형전환적영향,학인체외배양적혈관평활기세포불동표형적최가지표.방법 선택이미경배양전대적혈관평활기세포화체외배양적제4대혈관평활기세포작대비연구,채용면역조직화학법검측혈관평활기세포α기동단백,역전록취합매련반응검측혈관평활기세포기동단백22α、기질γ-최기곡안산단백화골교단백각목적기인mRNA상대표체수평,투사전경관찰혈관평활기세포적형태학특정,학정기표형전환특정급각표형지표적구분효능.결과 전경관찰현시,미경배양전대적혈관평활기세포포질중기사분포봉부、균균,병가견도수축표형혈관평활기세포적전형결구-밀반,내질망、고이기복합체등세포기상대교소;이체외배양지제4대시혈관평활기세포포질중기사명현감소,내질망、고이기복합체명현증다.원대혈관평활기세포α기동단백면역조직화학염색강차엄범,이체외배양지제4대시α기동단백염색명현변천、희소.제4대혈관평활기세포적골교단백mRNA표체량교원대혈관평활기세포현저증고(P<0.01),기동단백22α mRNA재혈관평활기세포중적표체량교원시혈관평활기세포강저,단차이불대,기질γ-최기곡안산단백mRNA표체량교미경배양전대적혈관평활기세포승고(P<0.05).결론 혈관평활기세포체외배양지제4대,즉가종전형적수축표형전화위합성표형,제시혈관평활기세포시일충흔용역거분화적세포.전경형태관찰α기동단백화골교단백재량형혈관평활기세포중적차이,가작위혈관평활기세포표형구분적유효표지.이기동단백22α화기질γ-최기곡안산단백적표체재량형혈관평활기세포중수유일정적차이,단중첩교대.