医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2011年
3期
85-90
,共6页
徐炜%顾栋桦%陈英武%平金良%姚根有
徐煒%顧棟樺%陳英武%平金良%姚根有
서위%고동화%진영무%평금량%요근유
喉肿瘤%RNA干扰%黏着斑激酶%基因沉默
喉腫瘤%RNA榦擾%黏著斑激酶%基因沉默
후종류%RNA간우%점착반격매%기인침묵
目的 探讨siRNA靶向慢病毒对人喉癌Hep-2细胞系FAK基因的沉默效应,以期探索喉鳞癌基因治疗的新途径.方法 Western Blot检测人喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2中的FAK蛋白表达水平.用FAK-RNAi慢病毒转染Hep-2细胞,同时监测转染效率.半定量RT-PCR检测FAK基因被FAK-siRNA沉默后mRNA的表达水平.Western-blotting检测FAK基因被FAK-siRNA沉默后蛋白质的表达水平.采用荧光PI染色检测凋亡细胞数目,MTT法检测细胞体外增生能力.结果 Western blot结果显示Hep-2细胞中FAK的3个蛋白片段表达量较高.多次重复western blot检测转染前后Hep-2细胞的FAK基因蛋白表达发现,FAK-RNAi慢病毒对目的基因在Hep2细胞中具有显著knockdown作用.使用RT-PCR技术检测FAK-siRNA干扰Hep-2细胞系前后FAK mRNA的表达发现,FAK-RNAi慢病毒对目的基因,在mRNA水平有明显knockdown作用.PI染料染色后,可见FAK-RNAi组30%～35%的肿瘤细胞凋亡.MTT Assay 结果显示,FAK-siRNA慢病毒转染Hep2细胞后,Hep2细胞活力明显下降.结论 经用慢病毒载体介导的FAK-siRNA在喉鳞癌细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应.
目的 探討siRNA靶嚮慢病毒對人喉癌Hep-2細胞繫FAK基因的沉默效應,以期探索喉鱗癌基因治療的新途徑.方法 Western Blot檢測人喉鱗狀細胞癌細胞繫Hep-2中的FAK蛋白錶達水平.用FAK-RNAi慢病毒轉染Hep-2細胞,同時鑑測轉染效率.半定量RT-PCR檢測FAK基因被FAK-siRNA沉默後mRNA的錶達水平.Western-blotting檢測FAK基因被FAK-siRNA沉默後蛋白質的錶達水平.採用熒光PI染色檢測凋亡細胞數目,MTT法檢測細胞體外增生能力.結果 Western blot結果顯示Hep-2細胞中FAK的3箇蛋白片段錶達量較高.多次重複western blot檢測轉染前後Hep-2細胞的FAK基因蛋白錶達髮現,FAK-RNAi慢病毒對目的基因在Hep2細胞中具有顯著knockdown作用.使用RT-PCR技術檢測FAK-siRNA榦擾Hep-2細胞繫前後FAK mRNA的錶達髮現,FAK-RNAi慢病毒對目的基因,在mRNA水平有明顯knockdown作用.PI染料染色後,可見FAK-RNAi組30%～35%的腫瘤細胞凋亡.MTT Assay 結果顯示,FAK-siRNA慢病毒轉染Hep2細胞後,Hep2細胞活力明顯下降.結論 經用慢病毒載體介導的FAK-siRNA在喉鱗癌細胞中可穫得高效轉染,併能產生特異性的基因沉默效應.
목적 탐토siRNA파향만병독대인후암Hep-2세포계FAK기인적침묵효응,이기탐색후린암기인치료적신도경.방법 Western Blot검측인후린상세포암세포계Hep-2중적FAK단백표체수평.용FAK-RNAi만병독전염Hep-2세포,동시감측전염효솔.반정량RT-PCR검측FAK기인피FAK-siRNA침묵후mRNA적표체수평.Western-blotting검측FAK기인피FAK-siRNA침묵후단백질적표체수평.채용형광PI염색검측조망세포수목,MTT법검측세포체외증생능력.결과 Western blot결과현시Hep-2세포중FAK적3개단백편단표체량교고.다차중복western blot검측전염전후Hep-2세포적FAK기인단백표체발현,FAK-RNAi만병독대목적기인재Hep2세포중구유현저knockdown작용.사용RT-PCR기술검측FAK-siRNA간우Hep-2세포계전후FAK mRNA적표체발현,FAK-RNAi만병독대목적기인,재mRNA수평유명현knockdown작용.PI염료염색후,가견FAK-RNAi조30%～35%적종류세포조망.MTT Assay 결과현시,FAK-siRNA만병독전염Hep2세포후,Hep2세포활력명현하강.결론 경용만병독재체개도적FAK-siRNA재후린암세포중가획득고효전염,병능산생특이성적기인침묵효응.
