中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2011年
4期
462-467
,共6页
腺病毒%Gateway技术%人肝细胞生长因子%NK4%基因治疗%肿瘤
腺病毒%Gateway技術%人肝細胞生長因子%NK4%基因治療%腫瘤
선병독%Gateway기술%인간세포생장인자%NK4%기인치료%종류
目的 利用Gateway技术构建含人肝细胞生长因子(HGF) NK4基因的重组腺病毒载体.方法 以含有HGF/NK4基因的质粒为模板PCR扩增NK4基因,将回收的NK4 PCR产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-6获得重组质粒pYr-adshuttle-6-NK4.从该重组质粒上,利用LR同源重组将NK4-IRES-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAD/BL-DEST,获得重组腺病毒质粒pAd-NK4-IRES-EGFP.该质粒经pacI线性化后转染293包装细胞,获得重组腺病毒rAd-NK4-IRES-EGFP.采用TCID 50(tissue cell infectious dosage 50,TCID 50)法测定重组腺病毒滴度.重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定.荧光显微镜观察转染效果.结果 证实腺病毒载体中含有NK4基因的目的 片段;病毒滴度为6.3×1011 PFU·L-1;荧光显微镜发现该重组腺病毒能在HEK293细胞中高效的表达.结论 利用Gateway技术可以快速地构建同时表达NK4蛋白和绿色荧光的重组腺病毒,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础.
目的 利用Gateway技術構建含人肝細胞生長因子(HGF) NK4基因的重組腺病毒載體.方法 以含有HGF/NK4基因的質粒為模闆PCR擴增NK4基因,將迴收的NK4 PCR產物片段剋隆至腺病毒穿梭載體pYr-adshuttle-6穫得重組質粒pYr-adshuttle-6-NK4.從該重組質粒上,利用LR同源重組將NK4-IRES-EGPF錶達框轉移至腺病毒骨架質粒pAD/BL-DEST,穫得重組腺病毒質粒pAd-NK4-IRES-EGFP.該質粒經pacI線性化後轉染293包裝細胞,穫得重組腺病毒rAd-NK4-IRES-EGFP.採用TCID 50(tissue cell infectious dosage 50,TCID 50)法測定重組腺病毒滴度.重組腺病毒分彆經酶切和PCR等方法進行鑒定.熒光顯微鏡觀察轉染效果.結果 證實腺病毒載體中含有NK4基因的目的 片段;病毒滴度為6.3×1011 PFU·L-1;熒光顯微鏡髮現該重組腺病毒能在HEK293細胞中高效的錶達.結論 利用Gateway技術可以快速地構建同時錶達NK4蛋白和綠色熒光的重組腺病毒,為下一步開展關于NK4基因的腫瘤治療提供瞭基礎.
목적 이용Gateway기술구건함인간세포생장인자(HGF) NK4기인적중조선병독재체.방법 이함유HGF/NK4기인적질립위모판PCR확증NK4기인,장회수적NK4 PCR산물편단극륭지선병독천사재체pYr-adshuttle-6획득중조질립pYr-adshuttle-6-NK4.종해중조질립상,이용LR동원중조장NK4-IRES-EGPF표체광전이지선병독골가질립pAD/BL-DEST,획득중조선병독질립pAd-NK4-IRES-EGFP.해질립경pacI선성화후전염293포장세포,획득중조선병독rAd-NK4-IRES-EGFP.채용TCID 50(tissue cell infectious dosage 50,TCID 50)법측정중조선병독적도.중조선병독분별경매절화PCR등방법진행감정.형광현미경관찰전염효과.결과 증실선병독재체중함유NK4기인적목적 편단;병독적도위6.3×1011 PFU·L-1;형광현미경발현해중조선병독능재HEK293세포중고효적표체.결론 이용Gateway기술가이쾌속지구건동시표체NK4단백화록색형광적중조선병독,위하일보개전관우NK4기인적종류치료제공료기출.
