天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2011年
6期
536-538
,共3页
钙-钙调素依赖性蛋白激酶2型%肌,骨骼%葡萄糖转运体4型%肌收缩%细胞,培养的%酶联免疫吸附测定%印迹法,蛋白质%氨乙酰胆碱
鈣-鈣調素依賴性蛋白激酶2型%肌,骨骼%葡萄糖轉運體4型%肌收縮%細胞,培養的%酶聯免疫吸附測定%印跡法,蛋白質%氨乙酰膽堿
개-개조소의뢰성단백격매2형%기,골격%포도당전운체4형%기수축%세포,배양적%매련면역흡부측정%인적법,단백질%안을선담감
目的:探讨钙一钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在收缩促进骨骼肌细胞葡萄糖转运子4(GLUT4)转位机制中的作用.方法:将接种在培养板中的C2C12 GLUT4myc小鼠肌管随机分为对照组和氨乙酰胆碱(Cch)组,各组分为抑制剂亚组和对照亚组.分别用10 μmol/L CaMK Ⅱ的特异性抑制剂KN93或KN62预孵育,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞膜上GLUT4myc的含量(转位);用KN93预孵育后,免疫印迹法测定蛋白激酶CaMKⅡ的磷酸化.结果:氨乙酰胆碱使细胞膜上GLUT4myc的水平显著增加.KN93和KN62抑制氨乙酰胆碱刺激的GLUT4myc转位.氨乙酰胆碱可增加CaMKⅡ的磷酸化,KN93不影响对照组CaMK Ⅱ的磷酸化水平,但可以抑制Cch刺激的CaMK Ⅱ磷酸化.结论:CaMK Ⅱ位于Ca2+下游并有介导收缩促进骨骼肌细胞GLUT4myc转位的作用.
目的:探討鈣一鈣調蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在收縮促進骨骼肌細胞葡萄糖轉運子4(GLUT4)轉位機製中的作用.方法:將接種在培養闆中的C2C12 GLUT4myc小鼠肌管隨機分為對照組和氨乙酰膽堿(Cch)組,各組分為抑製劑亞組和對照亞組.分彆用10 μmol/L CaMK Ⅱ的特異性抑製劑KN93或KN62預孵育,用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定細胞膜上GLUT4myc的含量(轉位);用KN93預孵育後,免疫印跡法測定蛋白激酶CaMKⅡ的燐痠化.結果:氨乙酰膽堿使細胞膜上GLUT4myc的水平顯著增加.KN93和KN62抑製氨乙酰膽堿刺激的GLUT4myc轉位.氨乙酰膽堿可增加CaMKⅡ的燐痠化,KN93不影響對照組CaMK Ⅱ的燐痠化水平,但可以抑製Cch刺激的CaMK Ⅱ燐痠化.結論:CaMK Ⅱ位于Ca2+下遊併有介導收縮促進骨骼肌細胞GLUT4myc轉位的作用.
목적:탐토개일개조단백의뢰성단백격매Ⅱ(CaMK Ⅱ)재수축촉진골격기세포포도당전운자4(GLUT4)전위궤제중적작용.방법:장접충재배양판중적C2C12 GLUT4myc소서기관수궤분위대조조화안을선담감(Cch)조,각조분위억제제아조화대조아조.분별용10 μmol/L CaMK Ⅱ적특이성억제제KN93혹KN62예부육,용매련면역흡부법(ELISA)측정세포막상GLUT4myc적함량(전위);용KN93예부육후,면역인적법측정단백격매CaMKⅡ적린산화.결과:안을선담감사세포막상GLUT4myc적수평현저증가.KN93화KN62억제안을선담감자격적GLUT4myc전위.안을선담감가증가CaMKⅡ적린산화,KN93불영향대조조CaMK Ⅱ적린산화수평,단가이억제Cch자격적CaMK Ⅱ린산화.결론:CaMK Ⅱ위우Ca2+하유병유개도수축촉진골격기세포GLUT4myc전위적작용.
