CAJ | 학술논문

背景与目的在实验动物存活条件下,通过活体成像技术能探测到标记有萤火虫荧光素酶( luc)基因的肿瘤细胞在体内的分布情况.本研究旨在稳定表达nm23-Hl shRNA的人肺腺癌细胞株A549中,建立能稳定表达萤火虫荧光素酶的发光细胞株A549/nm23-H1 -shRNA-luc,并检测其体内外发光情况,为下一步相关的体内实验提供实验材料.方法通过浓度梯度法测定A549/nm23-H1-shRNA细胞的潮霉素最佳筛选浓度,将带有萤火虫荧光素酶基因的PGL4.50质粒转入549/nm23-H 1-shRNA细胞中,利用潮霉素筛选单克隆细胞株A549/nm23-H 1-shRNA-luc,并采用生物发光技术对单克隆细胞株进行阳性鉴定并挑选发光最强的1个克隆分析其表达荧光素酶的稳定性.为检测A549/nm23-H1 -shRNA-luc细胞在体内发光的稳定性,将A549/nm23-H 1-shRNA-luc细胞接种于10只裸鼠右后腹股沟皮下之后,并随机分为两组,每组5只裸鼠,运用活体成像系统观察成像情况.结果 A549/nm23-H 1-shRNA-luc细胞的潮霉素最佳筛选浓度为300 μg/mL.经过潮霉素筛选所建立的A549/nm23-H1 -shRNA-luc细胞株能在体外稳定表达荧光素酶,细胞数(x)和生物发光值(y)呈直线相关,回归方程是:y=3,699.9x+992,237,R2=0.975,l.为评估此细胞株在体内生物发光的稳定性,将细胞种植进入10只裸鼠并随机分成两组,结果显示体内生物发光值差异不具有统计学意义(P＞0.05).结论成功建立了能持续、稳定表达荧光素酶的A549/nm23-H1-shRNA-luc细胞株.
배경여목적 재실험동물존활조건하,통과활체성상기술능탐측도표기유형화충형광소매( luc)기인적종류세포재체내적분포정황.본연구지재은정표체nm23-Hl shRNA적인폐선암세포주A549중,건립능은정표체형화충형광소매적발광세포주A549/nm23-H1 -shRNA-luc,병검측기체내외발광정황,위하일보상관적체내실험제공실험재료.방법 통과농도제도법측정A549/nm23-H1-shRNA세포적조매소최가사선농도,장대유형화충형광소매기인적PGL4.50질립전입549/nm23-H 1-shRNA세포중,이용조매소사선단극륭세포주A549/nm23-H 1-shRNA-luc,병채용생물발광기술대단극륭세포주진행양성감정병도선발광최강적1개극륭분석기표체형광소매적은정성.위검측A549/nm23-H1 -shRNA-luc세포재체내발광적은정성,장A549/nm23-H 1-shRNA-luc세포접충우10지라서우후복고구피하지후,병수궤분위량조,매조5지라서,운용활체성상계통관찰성상정황.결과 A549/nm23-H 1-shRNA-luc세포적조매소최가사선농도위300 μg/mL.경과조매소사선소건립적A549/nm23-H1 -shRNA-luc세포주능재체외은정표체형광소매,세포수(x)화생물발광치(y)정직선상관,회귀방정시:y=3,699.9x+992,237,R2=0.975,l.위평고차세포주재체내생물발광적은정성,장세포충식진입10지라서병수궤분성량조,결과현시체내생물발광치차이불구유통계학의의(P＞0.05).결론 성공건립료능지속、은정표체형광소매적A549/nm23-H1-shRNA-luc세포주.