CAJ | 학술논문

哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统.但在无蛋白培养基中,哺乳动物细胞生长活力差,且容易发生细胞凋亡,因而难以大规模培养.为解决此问题,应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr-细胞中同时表达Igf-1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合,通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力;通过Igf-1或Cyclin E促进细胞生长分裂,使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力.以上述基因组合转染CHO-dhfr-细胞,应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个,对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-BC1做进一步Western blot和流式细胞分析,确认此两个细胞株分别高表达Igf-1/Bcl-2和Bcl-2/Cyclin E基因组合.分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡,并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡,证明CHO-IB3和CHO-BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力.MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr-对照细胞.在细胞培养瓶中的连续培养实验表明,CHO-IB3和CHO-BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHO-dhfr-对照细胞.提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长,适于作为生物工程宿主细胞.
포유동물세포표체계통시생산중조단백약물최상용적표체계통.단재무단백배양기중,포유동물세포생장활력차,차용역발생세포조망,인이난이대규모배양.위해결차문제,응용쌍순반자표체재체재CHO-dhfr-세포중동시표체Igf-1/Bcl-2혹Bcl-2/Cyclin E기인조합,통과Bcl-2사세포획득항조망능력;통과Igf-1혹Cyclin E촉진세포생장분렬,사세포획득재무단백배양기중생장적능력.이상술기인조합전염CHO-dhfr-세포,응용Western blot종G418항성극륭중분별사선도Bcl-2고표체극륭약간개,대기중표체Bcl-2최고적CHO-IB3화CHO-BC1주진일보Western blot화류식세포분석,학인차량개세포주분별고표체Igf-1/Bcl-2화Bcl-2/Cyclin E기인조합.분별통과철거혈청화가입방선균소D유도세포조망,병이류식세포술화DNA Ladder법검측세포조망,증명CHO-IB3화CHO-BC1균구유교강적항세포조망능력.MTT법증명량개세포주재불함혈청적IMDM배양기중적증식활력현저고우CHO-dhfr-대조세포.재세포배양병중적련속배양실험표명,CHO-IB3화CHO-BC1재본실험실설계적IMEM무단백배양기중적생장속도화활세포수현저고우CHO-dhfr-대조세포.제시차량개세포계능구재무혈청배양기중항조망고활력생장,괄우작위생물공정숙주세포.