畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2004年
2期
121-124
,共4页
潘求真%陆泉枝%王海%敖红%连正兴%李宁%吴常信
潘求真%陸泉枝%王海%敖紅%連正興%李寧%吳常信
반구진%륙천지%왕해%오홍%련정흥%리저%오상신
山羊%胎儿成纤维细胞%转染%表达
山羊%胎兒成纖維細胞%轉染%錶達
산양%태인성섬유세포%전염%표체
转基因体细胞核移植是制备高效表达转基因动物的主要手段与方法,但由于插入位点、拷贝数不同常使外源基因的表达受到一定影响.本试验以双正向选择标记的pLoxP-M为转基因结构,以磷酸钙法、脂质体介导法、电击转染三种方法对山羊胎儿成纤维细胞进行转染.电击(1.70×10-4)和脂质体(1.36×10-4)法明显高于磷酸氢钙法(4.6×10-5),而且三方法的转染效率与细胞类型无关,但电击转染方法简单并适合于不同大小的转基因结构,对长片段更为实用.随机整合的转基因细胞系绿色荧光蛋白的表达水平有很大差异,主要与外源基因的拷贝数和插入位点有关.双正向选择标记不但可以筛选重组体而且可以体外监控外源基因的表达情况,为高表达转基因动物的制备提供了良好的手段与方法.
轉基因體細胞覈移植是製備高效錶達轉基因動物的主要手段與方法,但由于插入位點、拷貝數不同常使外源基因的錶達受到一定影響.本試驗以雙正嚮選擇標記的pLoxP-M為轉基因結構,以燐痠鈣法、脂質體介導法、電擊轉染三種方法對山羊胎兒成纖維細胞進行轉染.電擊(1.70×10-4)和脂質體(1.36×10-4)法明顯高于燐痠氫鈣法(4.6×10-5),而且三方法的轉染效率與細胞類型無關,但電擊轉染方法簡單併適閤于不同大小的轉基因結構,對長片段更為實用.隨機整閤的轉基因細胞繫綠色熒光蛋白的錶達水平有很大差異,主要與外源基因的拷貝數和插入位點有關.雙正嚮選擇標記不但可以篩選重組體而且可以體外鑑控外源基因的錶達情況,為高錶達轉基因動物的製備提供瞭良好的手段與方法.
전기인체세포핵이식시제비고효표체전기인동물적주요수단여방법,단유우삽입위점、고패수불동상사외원기인적표체수도일정영향.본시험이쌍정향선택표기적pLoxP-M위전기인결구,이린산개법、지질체개도법、전격전염삼충방법대산양태인성섬유세포진행전염.전격(1.70×10-4)화지질체(1.36×10-4)법명현고우린산경개법(4.6×10-5),이차삼방법적전염효솔여세포류형무관,단전격전염방법간단병괄합우불동대소적전기인결구,대장편단경위실용.수궤정합적전기인세포계록색형광단백적표체수평유흔대차이,주요여외원기인적고패수화삽입위점유관.쌍정향선택표기불단가이사선중조체이차가이체외감공외원기인적표체정황,위고표체전기인동물적제비제공료량호적수단여방법.
