中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2007年
5期
318-321
,共4页
马涛%李鼎锋%傅晶晶%李亮助%孙茂盛%刘勇%邵一鸣
馬濤%李鼎鋒%傅晶晶%李亮助%孫茂盛%劉勇%邵一鳴
마도%리정봉%부정정%리량조%손무성%류용%소일명
HIV-1/CN54%Nef蛋白%DNA疫苗%原核表达
HIV-1/CN54%Nef蛋白%DNA疫苗%原覈錶達
HIV-1/CN54%Nef단백%DNA역묘%원핵표체
目的 原核表达HIV-1 CN54调控蛋白Nef,并进行纯化、复性及鉴定.方法 将CN54 Nef基因克隆至pThioHisA载体,构建非融合表达载体,转化大肠杆菌BL21 Codonplus-RIL,IPTG诱导表达,通过尿素梯度洗涤包涵体纯化Nef蛋白,透析复性.Western blot检测目的蛋白的特异性.结果 Nef蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.用尿素洗涤法可直接纯化Nef,纯度达到90%以上.Nef蛋白透析后溶解于PBS缓冲液中.Western blot检测显示了良好的特异性.结论 HIV-1 CN54 Nef抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达,采用的纯化和复性Nef蛋白的工艺简便、快捷,为开发针对Nef基因的HIV-1疫苗奠定了基础.
目的 原覈錶達HIV-1 CN54調控蛋白Nef,併進行純化、複性及鑒定.方法 將CN54 Nef基因剋隆至pThioHisA載體,構建非融閤錶達載體,轉化大腸桿菌BL21 Codonplus-RIL,IPTG誘導錶達,通過尿素梯度洗滌包涵體純化Nef蛋白,透析複性.Western blot檢測目的蛋白的特異性.結果 Nef蛋白以包涵體的形式錶達,錶達量佔菌體總蛋白的40%以上.用尿素洗滌法可直接純化Nef,純度達到90%以上.Nef蛋白透析後溶解于PBS緩遲液中.Western blot檢測顯示瞭良好的特異性.結論 HIV-1 CN54 Nef抗原蛋白可在大腸桿菌中高效錶達,採用的純化和複性Nef蛋白的工藝簡便、快捷,為開髮針對Nef基因的HIV-1疫苗奠定瞭基礎.
목적 원핵표체HIV-1 CN54조공단백Nef,병진행순화、복성급감정.방법 장CN54 Nef기인극륭지pThioHisA재체,구건비융합표체재체,전화대장간균BL21 Codonplus-RIL,IPTG유도표체,통과뇨소제도세조포함체순화Nef단백,투석복성.Western blot검측목적단백적특이성.결과 Nef단백이포함체적형식표체,표체량점균체총단백적40%이상.용뇨소세조법가직접순화Nef,순도체도90%이상.Nef단백투석후용해우PBS완충액중.Western blot검측현시료량호적특이성.결론 HIV-1 CN54 Nef항원단백가재대장간균중고효표체,채용적순화화복성Nef단백적공예간편、쾌첩,위개발침대Nef기인적HIV-1역묘전정료기출.
