CAJ | 학술논문

目的:比较转染nNOSα和nNOSβ的PC12细胞NF-kappa B转录活性和细胞凋亡百分数,探讨nNOSα和nNOSβ在功能上的差异性.方法:将携带nNOSα和nNOSβ基因的pcDNA3.0表达质粒转化感受态细胞,在大肠杆菌中扩增后,提纯质粒酶切鉴定.nNOSα和nNOSβ基因的pcDNA3.0表达质粒通过脂质体转染PC12细胞,G418筛选,使用抗nNOS羧基端的抗体,通过免疫组织化学和Western Blot方法检测nNOS的表达效率.提取经G418筛选PC12细胞核蛋白,采用凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测细胞核NF-kappa B转录活性.不同PC12细胞经PI染色后流式细胞仪分选,测定不同增殖周期的细胞数.结果:质粒酶切鉴定结果与携带nNOSα和nNOSβ基因的pcDNA3.0质粒结构相符;免疫组织化学和Western Blot方法检测转染nNOS基因后表达的nNOSα和nNOSβ均高于未转染的PC12细胞(P＜0.05),PC12细胞转染nNOSα增加NF-kappa B转录活性(P＜0.05),而nNOSβ降低NF-kappa B转录活性(P＜0.05);转染nNOSα和nNOSβ及未转染的PC12细胞均不改变细胞凋亡百分数(P＞0.05).结论:nNOSα增加PC12细胞NF-kappa B转录活性,nNOSβ降低C12细胞NF-kappa B转录活性,但均不改变细胞凋亡百分数,nNOSα和nNOSβ在功能上具有差异性.
목적:비교전염nNOSα화nNOSβ적PC12세포NF-kappa B전록활성화세포조망백분수,탐토nNOSα화nNOSβ재공능상적차이성.방법:장휴대nNOSα화nNOSβ기인적pcDNA3.0표체질립전화감수태세포,재대장간균중확증후,제순질립매절감정.nNOSα화nNOSβ기인적pcDNA3.0표체질립통과지질체전염PC12세포,G418사선,사용항nNOS최기단적항체,통과면역조직화학화Western Blot방법검측nNOS적표체효솔.제취경G418사선PC12세포핵단백,채용응효전영조체실험(EMSA)검측세포핵NF-kappa B전록활성.불동PC12세포경PI염색후류식세포의분선,측정불동증식주기적세포수.결과:질립매절감정결과여휴대nNOSα화nNOSβ기인적pcDNA3.0질립결구상부;면역조직화학화Western Blot방법검측전염nNOS기인후표체적nNOSα화nNOSβ균고우미전염적PC12세포(P＜0.05),PC12세포전염nNOSα증가NF-kappa B전록활성(P＜0.05),이nNOSβ강저NF-kappa B전록활성(P＜0.05);전염nNOSα화nNOSβ급미전염적PC12세포균불개변세포조망백분수(P＞0.05).결론:nNOSα증가PC12세포NF-kappa B전록활성,nNOSβ강저C12세포NF-kappa B전록활성,단균불개변세포조망백분수,nNOSα화nNOSβ재공능상구유차이성.