CAJ | 학술논문

目的筛选机械张应变诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的相关基因.方法应用FX-4000T 细胞应变加载系统,对大鼠主动脉VSMCs施加1 Hz、10 % 张应变,Western blotting检测细胞在不同加载时间下Akt磷酸化水平的变化;用抑制消减杂交法(SSH) ,筛选给予PI3K的抑制剂Wortmannin和给予DMSO 两组细胞在加载张应变24 h后的差异表达基因片段,得到的消减杂交产物连接到T 载体上,经过蓝白斑筛选,对所有阳性克隆进行菌液PCR筛选及测序,应用BLASTN进行序列比对.结果机械张应变改变了VSMCs磷酸化Akt水平;SSH所获得的54个克隆随机挑选30个送测序,得到10个不同差异表达序列标签(EST),发现6个EST代表的大鼠基因可能与机械张应变诱导的VSMCs PI3K/Akt信号通路相关,它们是:High mobility group box 1(HMGB1), Neural precursor cell expressed(Nedd4a ), Cyclin-dependent kinase 5(CDK5), Histone deacetylase 3(HDAC3), Ubiquitin-like 1(Uble1a), Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1(hnRNP).结论 SSH有效筛选到了机械张应变诱导的VSMCs PI3K/Akt信号通路的相关基因,为进一步研究机械张应变诱导的血管病理生理改变提供了资料.
목적 사선궤계장응변유도적대서혈관평활기세포(VSMCs)린지선기순3격매/단백격매B(PI3K/Akt)신호통로적상관기인.방법 응용FX-4000T 세포응변가재계통,대대서주동맥VSMCs시가1 Hz、10 % 장응변,Western blotting검측세포재불동가재시간하Akt린산화수평적변화;용억제소감잡교법(SSH) ,사선급여PI3K적억제제Wortmannin화급여DMSO 량조세포재가재장응변24 h후적차이표체기인편단,득도적소감잡교산물련접도T 재체상,경과람백반사선,대소유양성극륭진행균액PCR사선급측서,응용BLASTN진행서렬비대.결과 궤계장응변개변료VSMCs린산화Akt수평;SSH소획득적54개극륭수궤도선30개송측서,득도10개불동차이표체서렬표첨(EST),발현6개EST대표적대서기인가능여궤계장응변유도적VSMCs PI3K/Akt신호통로상관,타문시:High mobility group box 1(HMGB1), Neural precursor cell expressed(Nedd4a ), Cyclin-dependent kinase 5(CDK5), Histone deacetylase 3(HDAC3), Ubiquitin-like 1(Uble1a), Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1(hnRNP).결론 SSH유효사선도료궤계장응변유도적VSMCs PI3K/Akt신호통로적상관기인,위진일보연구궤계장응변유도적혈관병리생리개변제공료자료.