携带IFN-β基因的丙型肝炎病毒微型基因组构建及抑制病毒复制的效应
휴대IFN-β기인적병형간염병독미형기인조구건급억제병독복제적효응
Construction of HCV minigenome containning IFN-β and investigation of its inhibitory effect on viral replication
  • 万方数据
    临床肝胆病杂志 림상간담병잡지
    CHINESE JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
    2011年 1期 57-60 ,共4页

    杨敬%雷迎峰%尹文%吕欣%陈任安%安群星%姚敏%贾战生%徐志凯

    양경%뢰영봉%윤문%려흔%진임안%안군성%요민%가전생%서지개

    肝炎病毒属%基因组,病毒%干扰素β%复制子 肝炎病毒屬%基因組,病毒%榦擾素β%複製子
    간염병독속%기인조,병독%간우소β%복제자
    目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)反应性干扰素(IFN)-β的微型基因组及其抑制效应的初步评价.方法 提取poly I:C刺激的淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增IFN-β基因,克隆入前期构建的HCV微型基因组pT7-5U△131-315rI3Urz;PCR并鉴定插入方向,将反向插入的质粒命名为pT7-5U△131-315rIFNI3Urz.将微型基因组5U△131-315rIFNI3URz克隆入pcDNA3.1载体,获得pCMV-5U△131-315rIFNI3URz.将体外转录的5U△131-315rIFNI3URz RNA转染Huh7.5BB7细胞,48 h后检测IFN-β的表达.将pCMV-5U△131-315rIFNI3URz转染Huh7.5 JFH-1细胞系,荧光实时定量PCR法测定细胞中HCV RNA.结果 成功建立了Huh7.5JFH-1细胞系;含有IFN-β的微型基因组在复制子细胞和HCV感染细胞中可以特异表达IFN-β;携带IFN-β的HCV微型基因组可以降低细胞中病毒的RNA拷贝水平,具有一定的剂量依赖效应.结论 反向插入IFN-β基因的HCV微型基因组进入HCV感染细胞内表达IFN-β并靶向抑制病毒的复制,为抗HCV感染研究提供了一个新的方法和思路.
    목적 구건병형간염병독(HCV)반응성간우소(IFN)-β적미형기인조급기억제효응적초보평개.방법 제취poly I:C자격적림파세포총RNA,RT-PCR확증IFN-β기인,극륭입전기구건적HCV미형기인조pT7-5U△131-315rI3Urz;PCR병감정삽입방향,장반향삽입적질립명명위pT7-5U△131-315rIFNI3Urz.장미형기인조5U△131-315rIFNI3URz극륭입pcDNA3.1재체,획득pCMV-5U△131-315rIFNI3URz.장체외전록적5U△131-315rIFNI3URz RNA전염Huh7.5BB7세포,48 h후검측IFN-β적표체.장pCMV-5U△131-315rIFNI3URz전염Huh7.5 JFH-1세포계,형광실시정량PCR법측정세포중HCV RNA.결과 성공건립료Huh7.5JFH-1세포계;함유IFN-β적미형기인조재복제자세포화HCV감염세포중가이특이표체IFN-β;휴대IFN-β적HCV미형기인조가이강저세포중병독적RNA고패수평,구유일정적제량의뢰효응.결론 반향삽입IFN-β기인적HCV미형기인조진입HCV감염세포내표체IFN-β병파향억제병독적복제,위항HCV감염연구제공료일개신적방법화사로.
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