解剖与临床
解剖與臨床
해부여림상
JOURNAL OF ANATOMY AND CLINICS
2012年
3期
206-211
,共6页
徐宏光%张小海%王弘%刘平%王凌挺%宋俊兴
徐宏光%張小海%王弘%劉平%王凌挺%宋俊興
서굉광%장소해%왕홍%류평%왕릉정%송준흥
终板%软骨细胞%表型%TGF-β1%ANK%ENPP1
終闆%軟骨細胞%錶型%TGF-β1%ANK%ENPP1
종판%연골세포%표형%TGF-β1%ANK%ENPP1
目的:通过大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型,探讨传代过程中钙化相关基因ANK、ENPP1及内源性生长因子TGF-β1表达的变化及其意义.方法:取大鼠腰椎终板软骨细胞,采用酶消化法及自然传代法分离培养,选取P1、P5及P7代,均在体外培养6 d,分别用HE染色、甲苯胺蓝染色及Real-time RT-PCR法检测软骨标志性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖、转录因子Sox9变化,对终板软骨细胞表型进行鉴定.用Real-time RT-PCR及Western blot检测钙化相关基因ANK、ENPP1的变化,Real-time RT-PCR及ELISA检测生长因子TGF-β1的变化.结果:随着细胞传至P7代,细胞形态上有梭形变趋势.茜素红染色无明显变化.软骨标志性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖及转录因子Sox9表达均明显下调(P＜0.05),钙化相关基因ANK、ENPP1表达均明显下调(P＜0.05),内源性生长因子TGF-β1表达明显下调(P＜0.05).结论:终板软骨细胞传至P7代,终板软骨细胞发生退变,终板软骨细胞内未见钙盐沉积,钙化相关基因ANK、ENPP1下调可能由内源性TGF-β1下调引起,提示调节内源性TGF-β1及钙化相关基因ANK、ENPP1在终板软骨中的表达有可能会阻止椎间盘的退变.
目的:通過大鼠終闆軟骨細胞體外自然傳代的退變模型,探討傳代過程中鈣化相關基因ANK、ENPP1及內源性生長因子TGF-β1錶達的變化及其意義.方法:取大鼠腰椎終闆軟骨細胞,採用酶消化法及自然傳代法分離培養,選取P1、P5及P7代,均在體外培養6 d,分彆用HE染色、甲苯胺藍染色及Real-time RT-PCR法檢測軟骨標誌性基因Ⅱ型膠原、蛋白多糖、轉錄因子Sox9變化,對終闆軟骨細胞錶型進行鑒定.用Real-time RT-PCR及Western blot檢測鈣化相關基因ANK、ENPP1的變化,Real-time RT-PCR及ELISA檢測生長因子TGF-β1的變化.結果:隨著細胞傳至P7代,細胞形態上有梭形變趨勢.茜素紅染色無明顯變化.軟骨標誌性基因Ⅱ型膠原、蛋白多糖及轉錄因子Sox9錶達均明顯下調(P＜0.05),鈣化相關基因ANK、ENPP1錶達均明顯下調(P＜0.05),內源性生長因子TGF-β1錶達明顯下調(P＜0.05).結論:終闆軟骨細胞傳至P7代,終闆軟骨細胞髮生退變,終闆軟骨細胞內未見鈣鹽沉積,鈣化相關基因ANK、ENPP1下調可能由內源性TGF-β1下調引起,提示調節內源性TGF-β1及鈣化相關基因ANK、ENPP1在終闆軟骨中的錶達有可能會阻止椎間盤的退變.
목적:통과대서종판연골세포체외자연전대적퇴변모형,탐토전대과정중개화상관기인ANK、ENPP1급내원성생장인자TGF-β1표체적변화급기의의.방법:취대서요추종판연골세포,채용매소화법급자연전대법분리배양,선취P1、P5급P7대,균재체외배양6 d,분별용HE염색、갑분알람염색급Real-time RT-PCR법검측연골표지성기인Ⅱ형효원、단백다당、전록인자Sox9변화,대종판연골세포표형진행감정.용Real-time RT-PCR급Western blot검측개화상관기인ANK、ENPP1적변화,Real-time RT-PCR급ELISA검측생장인자TGF-β1적변화.결과:수착세포전지P7대,세포형태상유사형변추세.천소홍염색무명현변화.연골표지성기인Ⅱ형효원、단백다당급전록인자Sox9표체균명현하조(P＜0.05),개화상관기인ANK、ENPP1표체균명현하조(P＜0.05),내원성생장인자TGF-β1표체명현하조(P＜0.05).결론:종판연골세포전지P7대,종판연골세포발생퇴변,종판연골세포내미견개염침적,개화상관기인ANK、ENPP1하조가능유내원성TGF-β1하조인기,제시조절내원성TGF-β1급개화상관기인ANK、ENPP1재종판연골중적표체유가능회조지추간반적퇴변.
