CAJ | 학술논문

目的构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF/IL-6融合蛋白分子. 方法应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒,4种融合蛋白分别是GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(简称GI1)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(简称GI2)、GM-CSF(1～127)-IL-6(1～184)(简称GI3)、GM-CSF(9～127)-IL-6(24～184)(简称GI4),表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达.通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用hGM-CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性. 结果对4种融合蛋白基因的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达,表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白,其纯度均达到95%以上.活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性. 结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF/IL-6融合蛋白.
목적구건급표체구유hGM-CSF화hIL-6쌍중생물학활성적hGM-CSF/IL-6융합단백분자. 방법응용PCR기술대hGM-CSF화hIL-6적기인분별가이개조,동시재이자지간가상련접태서렬(G-G-S-G-S)3,극륭PCR산물,병구건성극륭유4충융합단백기인적pBV220표체질립,4충융합단백분별시GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(간칭GI1)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(간칭GI2)、GM-CSF(1～127)-IL-6(1～184)(간칭GI3)、GM-CSF(9～127)-IL-6(24～184)(간칭GI4),표체질립분별도입E.coli BL-21중유도표체.통과Q Sepharose HP리자교환주화 Sephacryl S-200분자사주이보주순화이획취목적단백.사용hGM-CSF의뢰세포주TF1화hIL-6의뢰세포주B9통과MTT법측량융합단백적생물학활성. 결과대4충융합단백기인적측서결과표명,기서렬여이론설계완전일치,표체질립재E.coli BL-21중균득도고효표체,표체적융합단백균점도총단백함량적30%이상,표체산물이포함체적형식존재,통과Q Sepharose HP리자교환주화 Sephacryl S-200분자사주이보주순화급복성후획득4충목적단백,기순도균체도95%이상.활성측정결과표명4충융합단백균구유교고적hGM-CSF화hIL-6적쌍중생물학활성. 결론획득료구유교고순도화쌍중생물학활성적GM-CSF/IL-6융합단백.