微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2003年
4期
417-423
,共7页
汤慕瑾%谭乐%余健秀%袁美妗%庞义
湯慕瑾%譚樂%餘健秀%袁美妗%龐義
탕모근%담악%여건수%원미금%방의
苏云金芽胞杆菌%cry1Ab16基因%克隆%表达
囌雲金芽胞桿菌%cry1Ab16基因%剋隆%錶達
소운금아포간균%cry1Ab16기인%극륭%표체
通过对已知cry1类基因以及已发表的cry1Ab的序列进行分析,分别设计了引物P1、P2、P3和P4,首次从无晶体的芽胞杆菌AC-11中扩增到一个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal protein, ICP)cry1Ab类基因.测序结果显示该基因与已知的cry1Ab1基因有8个核苷酸不同,编码的蛋白有7个氨基酸差异.此基因已登录GenBank,并命名为新亚型基因cry1Ab16 (Ac. NO. AF375608).Southern杂交结果进一步证实该基因存在于菌体的质粒上.将cry1Ab16基因克隆到Escherichia coli表达载体pQE30上并转化E. coli M15.Western印迹分析表明,E. coli M15表达了130 kD的Cry1Ab16蛋白,但此蛋白不稳定,大部分降解成65 kD的蛋白.将表达Cry1Ab16 蛋白的大肠杆菌用涂布法对三龄小菜蛾(Plutella xylostella)毒力测定,其LC50为258.3mg/L;对其他夜蛾科害虫的生长发育也有明显的抑制作用.
通過對已知cry1類基因以及已髮錶的cry1Ab的序列進行分析,分彆設計瞭引物P1、P2、P3和P4,首次從無晶體的芽胞桿菌AC-11中擴增到一箇囌雲金芽胞桿菌殺蟲晶體蛋白(Insecticidal crystal protein, ICP)cry1Ab類基因.測序結果顯示該基因與已知的cry1Ab1基因有8箇覈苷痠不同,編碼的蛋白有7箇氨基痠差異.此基因已登錄GenBank,併命名為新亞型基因cry1Ab16 (Ac. NO. AF375608).Southern雜交結果進一步證實該基因存在于菌體的質粒上.將cry1Ab16基因剋隆到Escherichia coli錶達載體pQE30上併轉化E. coli M15.Western印跡分析錶明,E. coli M15錶達瞭130 kD的Cry1Ab16蛋白,但此蛋白不穩定,大部分降解成65 kD的蛋白.將錶達Cry1Ab16 蛋白的大腸桿菌用塗佈法對三齡小菜蛾(Plutella xylostella)毒力測定,其LC50為258.3mg/L;對其他夜蛾科害蟲的生長髮育也有明顯的抑製作用.
통과대이지cry1류기인이급이발표적cry1Ab적서렬진행분석,분별설계료인물P1、P2、P3화P4,수차종무정체적아포간균AC-11중확증도일개소운금아포간균살충정체단백(Insecticidal crystal protein, ICP)cry1Ab류기인.측서결과현시해기인여이지적cry1Ab1기인유8개핵감산불동,편마적단백유7개안기산차이.차기인이등록GenBank,병명명위신아형기인cry1Ab16 (Ac. NO. AF375608).Southern잡교결과진일보증실해기인존재우균체적질립상.장cry1Ab16기인극륭도Escherichia coli표체재체pQE30상병전화E. coli M15.Western인적분석표명,E. coli M15표체료130 kD적Cry1Ab16단백,단차단백불은정,대부분강해성65 kD적단백.장표체Cry1Ab16 단백적대장간균용도포법대삼령소채아(Plutella xylostella)독력측정,기LC50위258.3mg/L;대기타야아과해충적생장발육야유명현적억제작용.
