细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
5期
529-531
,共3页
石琳%陈振萍%袁向飞%杨少光%张宇光%韩忠朝
石琳%陳振萍%袁嚮飛%楊少光%張宇光%韓忠朝
석림%진진평%원향비%양소광%장우광%한충조
胰岛素原%腺病毒载体/pAdEasy-1%弗林蛋白酶
胰島素原%腺病毒載體/pAdEasy-1%弗林蛋白酶
이도소원%선병독재체/pAdEasy-1%불림단백매
目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;最后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础.
目的:構建含有定點突變的人胰島素原基因的腺病毒錶達載體.方法:首先利用RT-PCR方法從正常流產胎兒胰腺組織穫取野生型人胰島素原eDNA;然後通過重疊延伸PCR方法在人胰島素原cDNA上產生2箇突變位點,使突變的eDNA編碼的蛋白質含弗林蛋白酶的識彆位點,該突變型胰島素原cDNA片段命名為INS-M2;最後將INS-M2亞剋隆至腺病毒載體繫統的穿梭載體的多剋隆位點上,併與骨架載體共轉染至細菌內,通過細菌內同源重組得到重組載體.結果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及測序均證實載體pAd-INS-M2構建成功.結論:構建的含定點突變人胰島素原基因腺病毒載體pAd-INS-M2為進一步轉染非胰島β細胞,對糖尿病進行基因治療奠定瞭基礎.
목적:구건함유정점돌변적인이도소원기인적선병독표체재체.방법:수선이용RT-PCR방법종정상유산태인이선조직획취야생형인이도소원eDNA;연후통과중첩연신PCR방법재인이도소원cDNA상산생2개돌변위점,사돌변적eDNA편마적단백질함불림단백매적식별위점,해돌변형이도소원cDNA편단명명위INS-M2;최후장INS-M2아극륭지선병독재체계통적천사재체적다극륭위점상,병여골가재체공전염지세균내,통과세균내동원중조득도중조재체.결과:HindⅢ화Xho I매절、Poc I매절급측서균증실재체pAd-INS-M2구건성공.결론:구건적함정점돌변인이도소원기인선병독재체pAd-INS-M2위진일보전염비이도β세포,대당뇨병진행기인치료전정료기출.
