色谱
色譜
색보
CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
2009年
5期
717-723
,共7页
疏水相互作用色谱%蛋白分离%分离度%色谱饼%动力学因素%生物工程%粒细胞集落刺激因子
疏水相互作用色譜%蛋白分離%分離度%色譜餅%動力學因素%生物工程%粒細胞集落刺激因子
소수상호작용색보%단백분리%분리도%색보병%동역학인소%생물공정%립세포집락자격인자
依据液相色谱分离整体蛋白的效果与色谱柱柱长基本无关的事实,研究了动力学因素对疏水相互作用色谱(HIC)分离整体蛋白的影响.首次提出了用于线性梯度洗脱条件下蛋白分离的"条件板高"(H)概念,并将其用于动力学因素对分离整体蛋白的影响的表征.分别用常用的色谱柱和色谱饼对标准蛋白进行了分离,绘制了类似于van Deemter的"条件板高"对流动相线速(u)的曲线图.发现对应于色谱柱最低"条件板高"的适合线速约为色谱饼的1/5～1/15,且色谱饼的适合线速范围也较色谱柱宽得多.据此,用装填有HIC填料的色谱饼(10 mm×20 mm i.d.)在12 min内便可完全分离7种标准蛋白.还用装填有HIC填料的色谱饼对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行了复性并同时纯化,在50 min内,仅用一步色谱法就可获得纯度≥97%的rhG-CSF,其质量回收率为39% ,比活＞1×108 IU/mg.可以预计,装填极细颗粒的刚性色谱填料的色谱饼可在高负荷条件下进行整体蛋白的高速和高分离度的分离、纯化并同时复性,达到"三高".
依據液相色譜分離整體蛋白的效果與色譜柱柱長基本無關的事實,研究瞭動力學因素對疏水相互作用色譜(HIC)分離整體蛋白的影響.首次提齣瞭用于線性梯度洗脫條件下蛋白分離的"條件闆高"(H)概唸,併將其用于動力學因素對分離整體蛋白的影響的錶徵.分彆用常用的色譜柱和色譜餅對標準蛋白進行瞭分離,繪製瞭類似于van Deemter的"條件闆高"對流動相線速(u)的麯線圖.髮現對應于色譜柱最低"條件闆高"的適閤線速約為色譜餅的1/5～1/15,且色譜餅的適閤線速範圍也較色譜柱寬得多.據此,用裝填有HIC填料的色譜餅(10 mm×20 mm i.d.)在12 min內便可完全分離7種標準蛋白.還用裝填有HIC填料的色譜餅對重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)進行瞭複性併同時純化,在50 min內,僅用一步色譜法就可穫得純度≥97%的rhG-CSF,其質量迴收率為39% ,比活＞1×108 IU/mg.可以預計,裝填極細顆粒的剛性色譜填料的色譜餅可在高負荷條件下進行整體蛋白的高速和高分離度的分離、純化併同時複性,達到"三高".
의거액상색보분리정체단백적효과여색보주주장기본무관적사실,연구료동역학인소대소수상호작용색보(HIC)분리정체단백적영향.수차제출료용우선성제도세탈조건하단백분리적"조건판고"(H)개념,병장기용우동역학인소대분리정체단백적영향적표정.분별용상용적색보주화색보병대표준단백진행료분리,회제료유사우van Deemter적"조건판고"대류동상선속(u)적곡선도.발현대응우색보주최저"조건판고"적괄합선속약위색보병적1/5～1/15,차색보병적괄합선속범위야교색보주관득다.거차,용장전유HIC전료적색보병(10 mm×20 mm i.d.)재12 min내편가완전분리7충표준단백.환용장전유HIC전료적색보병대중조인립세포집락자격인자(rhG-CSF)진행료복성병동시순화,재50 min내,부용일보색보법취가획득순도≥97%적rhG-CSF,기질량회수솔위39% ,비활＞1×108 IU/mg.가이예계,장전겁세과립적강성색보전료적색보병가재고부하조건하진행정체단백적고속화고분리도적분리、순화병동시복성,체도"삼고".
