重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
10期
1471-1474
,共4页
朱冰%杨建茹%江跃全%陈诗奉%付新平%张力平%汪天虎%程波
硃冰%楊建茹%江躍全%陳詩奉%付新平%張力平%汪天虎%程波
주빙%양건여%강약전%진시봉%부신평%장력평%왕천호%정파
Ⅰ型单纯疱疹病毒%长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白%基因重组
Ⅰ型單純皰疹病毒%長臂猿白血病病毒緻融性外膜糖蛋白%基因重組
Ⅰ형단순포진병독%장비원백혈병병독치융성외막당단백%기인중조
目的:包装已成功构建的受Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus Ⅰ,HSV-Ⅰ)晚期表达基因-UL38启动子调控的、嗜肿瘤单纯疱疹病毒介导的,长臂猿白血病病毒致融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因质粒(HSV-UL38P-GALV.fus),无肿瘤特异性巨细胞病毒启动子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus质粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治疗对照质粒(HSV-CMVP-EGFP),分别命名为Synco-2、Synco-1、Baco-1.方法:扩增已成功构建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP质粒,然后分别在Vero细胞用脂质体转染、包装成重组嗜肿瘤单纯疱疹病毒.重组单纯疱疹病毒的扩增及纯化采用Vero细胞及氯化铯纯化常规方法,病毒滴度测定采用TCID50法.Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌细胞株HepG2,分别提取受染肝癌细胞HepG2的总RNA,以RT-PCR的方法鉴定GALV.fus基因的表达.结果:成功包装了3种重组单纯疱疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero细胞内扩增后以氯化铯密度梯度离心法进行纯化,TCID50法测得病毒滴度分别为3×1010 pfu/ml,1×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml.受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达.结论:成功包装、扩增及纯化3种重组单纯疱疹病毒,受染肝癌细胞株HepG2中以RT-PCR法检测到GALV.fus基因的表达.
目的:包裝已成功構建的受Ⅰ型單純皰疹病毒(Herpes simplex virus Ⅰ,HSV-Ⅰ)晚期錶達基因-UL38啟動子調控的、嗜腫瘤單純皰疹病毒介導的,長臂猿白血病病毒緻融性外膜糖蛋白(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)基因質粒(HSV-UL38P-GALV.fus),無腫瘤特異性巨細胞病毒啟動子(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus質粒(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus基因片段被增彊型綠色熒光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因片段所取代的治療對照質粒(HSV-CMVP-EGFP),分彆命名為Synco-2、Synco-1、Baco-1.方法:擴增已成功構建的HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP質粒,然後分彆在Vero細胞用脂質體轉染、包裝成重組嗜腫瘤單純皰疹病毒.重組單純皰疹病毒的擴增及純化採用Vero細胞及氯化銫純化常規方法,病毒滴度測定採用TCID50法.Synco-1、Synco-2病毒感染肝癌細胞株HepG2,分彆提取受染肝癌細胞HepG2的總RNA,以RT-PCR的方法鑒定GALV.fus基因的錶達.結果:成功包裝瞭3種重組單純皰疹病毒Baco-1、Synco-1和Synco-2,按需要在Vero細胞內擴增後以氯化銫密度梯度離心法進行純化,TCID50法測得病毒滴度分彆為3×1010 pfu/ml,1×1011 pfu/ml和4×1010 pfu/ml.受染肝癌細胞株HepG2中以RT-PCR法檢測到GALV.fus基因的錶達.結論:成功包裝、擴增及純化3種重組單純皰疹病毒,受染肝癌細胞株HepG2中以RT-PCR法檢測到GALV.fus基因的錶達.
목적:포장이성공구건적수Ⅰ형단순포진병독(Herpes simplex virus Ⅰ,HSV-Ⅰ)만기표체기인-UL38계동자조공적、기종류단순포진병독개도적,장비원백혈병병독치융성외막당단백(Gibbon ape leukemia virus membrance fusion glycopratein,GALV.fus)기인질립(HSV-UL38P-GALV.fus),무종류특이성거세포병독계동자(Cytomegalovirus promoter,CMVP)GALV.fus질립(HSV-CMVP-GALV.fus),GALV.fus기인편단피증강형록색형광단백(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)기인편단소취대적치료대조질립(HSV-CMVP-EGFP),분별명명위Synco-2、Synco-1、Baco-1.방법:확증이성공구건적HSV-UL38P-GALV.fus、HSV-CMVP-GALV.fus、HSV-CMVP-EGFP질립,연후분별재Vero세포용지질체전염、포장성중조기종류단순포진병독.중조단순포진병독적확증급순화채용Vero세포급록화색순화상규방법,병독적도측정채용TCID50법.Synco-1、Synco-2병독감염간암세포주HepG2,분별제취수염간암세포HepG2적총RNA,이RT-PCR적방법감정GALV.fus기인적표체.결과:성공포장료3충중조단순포진병독Baco-1、Synco-1화Synco-2,안수요재Vero세포내확증후이록화색밀도제도리심법진행순화,TCID50법측득병독적도분별위3×1010 pfu/ml,1×1011 pfu/ml화4×1010 pfu/ml.수염간암세포주HepG2중이RT-PCR법검측도GALV.fus기인적표체.결론:성공포장、확증급순화3충중조단순포진병독,수염간암세포주HepG2중이RT-PCR법검측도GALV.fus기인적표체.
