生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
5期
227-230
,共4页
李瑞芳%薛雯雯%黄亮%熊前程%王彬
李瑞芳%薛雯雯%黃亮%熊前程%王彬
리서방%설문문%황량%웅전정%왕빈
枯草芽孢杆菌%感受态细胞%质粒转化方法
枯草芽孢桿菌%感受態細胞%質粒轉化方法
고초아포간균%감수태세포%질립전화방법
为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进.用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DBl342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响.结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DBl342的转化率为750 CFU/μg/DNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/xg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg/DNA.根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内.
為便于枯草芽孢桿菌工業化生產應用,對Spizizen創立的枯草芽孢桿菌DNA轉化方法進行改進.用GMI和GMII溶液處理枯草芽孢桿菌野生型菌株BS501a、營養缺陷型突變株DBl342和非營養缺陷型突變株WB800,用改進的方法製備感受態細胞,用7.5kb質粒pSBPTQ進行轉化,併研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培養方法對枯草芽孢桿菌質粒轉化的影響.結果錶明,該方法適用于不同基因型枯草芽孢桿菌的質粒轉化,營養缺陷型突變株DBl342的轉化率為750 CFU/μg/DNA,非營養缺陷型突變株WB800轉化率為1 070 CFU/xg DNA,野生型菌株BS501a轉化率為270 CFU/μg/DNA.根據影響轉化效率的因素,推測在該方法中,枯草芽孢桿菌質粒轉化原理:一定生物量的枯草芽孢桿菌在外界營養條件和鈣、鎂離子作用下,細胞壁和細胞膜形成缺陷,使外源DNA轉入枯草芽孢桿菌細胞內.
위편우고초아포간균공업화생산응용,대Spizizen창립적고초아포간균DNA전화방법진행개진.용GMI화GMII용액처리고초아포간균야생형균주BS501a、영양결함형돌변주DBl342화비영양결함형돌변주WB800,용개진적방법제비감수태세포,용7.5kb질립pSBPTQ진행전화,병연구RNA、효모분、수해락단백、배양방법대고초아포간균질립전화적영향.결과표명,해방법괄용우불동기인형고초아포간균적질립전화,영양결함형돌변주DBl342적전화솔위750 CFU/μg/DNA,비영양결함형돌변주WB800전화솔위1 070 CFU/xg DNA,야생형균주BS501a전화솔위270 CFU/μg/DNA.근거영향전화효솔적인소,추측재해방법중,고초아포간균질립전화원리:일정생물량적고초아포간균재외계영양조건화개、미리자작용하,세포벽화세포막형성결함,사외원DNA전입고초아포간균세포내.
