动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2011年
11期
6-9
,共4页
周松峰%吴健敏%关忠宜%廖文军%白安斌
週鬆峰%吳健敏%關忠宜%廖文軍%白安斌
주송봉%오건민%관충의%료문군%백안빈
伪狂犬病病毒%KgE基因%原核表达
偽狂犬病病毒%KgE基因%原覈錶達
위광견병병독%KgE기인%원핵표체
从伪狂犬病病毒(PRV)基因组中克隆出KgE抗原表位基因,并将其插入到原核表达载体pETTrx中,构建了原核表达质粒pET-Trx-KgE,将pET-Trx-KgE转化至BL21 (DE3) plysS中,在IPTG诱导下进行表达.SDS-PAGE分析表明,KgE基因在BL21( DE3) plysS中获得高效表达,表达量占茵体总蛋白的32.8％,主要以包涵体形式存在,分子质量约为36 ku.将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达到99.2％.Western blot检测发现,表达的KgE蛋白能够与PRV高免血清发生特异反应,但与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒等阳性血清不发生反应,表明KgE蛋白具有良好的抗原性.
從偽狂犬病病毒(PRV)基因組中剋隆齣KgE抗原錶位基因,併將其插入到原覈錶達載體pETTrx中,構建瞭原覈錶達質粒pET-Trx-KgE,將pET-Trx-KgE轉化至BL21 (DE3) plysS中,在IPTG誘導下進行錶達.SDS-PAGE分析錶明,KgE基因在BL21( DE3) plysS中穫得高效錶達,錶達量佔茵體總蛋白的32.8％,主要以包涵體形式存在,分子質量約為36 ku.將錶達的蛋白以親和層析法進行純化併通過穀胱甘肽還原法進行複性,純化後蛋白純度達到99.2％.Western blot檢測髮現,錶達的KgE蛋白能夠與PRV高免血清髮生特異反應,但與豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒、豬瘟病毒等暘性血清不髮生反應,錶明KgE蛋白具有良好的抗原性.
종위광견병병독(PRV)기인조중극륭출KgE항원표위기인,병장기삽입도원핵표체재체pETTrx중,구건료원핵표체질립pET-Trx-KgE,장pET-Trx-KgE전화지BL21 (DE3) plysS중,재IPTG유도하진행표체.SDS-PAGE분석표명,KgE기인재BL21( DE3) plysS중획득고효표체,표체량점인체총단백적32.8％,주요이포함체형식존재,분자질량약위36 ku.장표체적단백이친화층석법진행순화병통과곡광감태환원법진행복성,순화후단백순도체도99.2％.Western blot검측발현,표체적KgE단백능구여PRV고면혈청발생특이반응,단여저번식여호흡종합정병독、저온병독등양성혈청불발생반응,표명KgE단백구유량호적항원성.
