武警医学院学报
武警醫學院學報
무경의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE CPAPF
2012年
6期
405-407
,共3页
牟心红%李海生%梁林%张文成
牟心紅%李海生%樑林%張文成
모심홍%리해생%량림%장문성
锌指蛋白580%原核表达%SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳
鋅指蛋白580%原覈錶達%SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳
자지단백580%원핵표체%SDS취병희선안응효전영
[目的]构建ZFP580基因的原核表达质粒,转化大肠杆菌,诱导表达并分离纯化大鼠锌指蛋白ZFP580.[方法]根据ZFP580 cDNA序列的开放阅读框设计引物,利用PCR技术扩增ZFP580的开放阅读框cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,NcoI、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序.将构建的重组质粒pET30a-ZFP580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白.[结果]成功扩增ZFP580基因并构建了表达质粒pET30a-ZFP580,测序结果表明与GeneBank公布的序列一致.含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa.[结论]成功表达并纯化了大鼠ZFP580蛋白,为进一步研究锌指蛋白ZFP580的功能奠定了基础.
[目的]構建ZFP580基因的原覈錶達質粒,轉化大腸桿菌,誘導錶達併分離純化大鼠鋅指蛋白ZFP580.[方法]根據ZFP580 cDNA序列的開放閱讀框設計引物,利用PCR技術擴增ZFP580的開放閱讀框cDNA序列,將PCR擴增的目的片段與載體pET30a分彆雙酶切、迴收純化後做定嚮連接,NcoI、XhoI雙酶切電泳篩選、鑒定併測序.將構建的重組質粒pET30a-ZFP580轉化大腸桿菌BL21(DE3),由異丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達併純化目的蛋白.[結果]成功擴增ZFP580基因併構建瞭錶達質粒pET30a-ZFP580,測序結果錶明與GeneBank公佈的序列一緻.含有該質粒的大腸桿菌BL21(DE3)經IPTG誘導錶達後,產物蛋白分子量約為19 kDa.[結論]成功錶達併純化瞭大鼠ZFP580蛋白,為進一步研究鋅指蛋白ZFP580的功能奠定瞭基礎.
[목적]구건ZFP580기인적원핵표체질립,전화대장간균,유도표체병분리순화대서자지단백ZFP580.[방법]근거ZFP580 cDNA서렬적개방열독광설계인물,이용PCR기술확증ZFP580적개방열독광cDNA서렬,장PCR확증적목적편단여재체pET30a분별쌍매절、회수순화후주정향련접,NcoI、XhoI쌍매절전영사선、감정병측서.장구건적중조질립pET30a-ZFP580전화대장간균BL21(DE3),유이병기-β-D-반유당감(IPTG)유도표체병순화목적단백.[결과]성공확증ZFP580기인병구건료표체질립pET30a-ZFP580,측서결과표명여GeneBank공포적서렬일치.함유해질립적대장간균BL21(DE3)경IPTG유도표체후,산물단백분자량약위19 kDa.[결론]성공표체병순화료대서ZFP580단백,위진일보연구자지단백ZFP580적공능전정료기출.
