中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
2期
258-263
,共6页
彭玮丹%张杰%赵永同%惠宏襄%朱峰%杨安钢%王成济
彭瑋丹%張傑%趙永同%惠宏襄%硃峰%楊安鋼%王成濟
팽위단%장걸%조영동%혜굉양%주봉%양안강%왕성제
Bcl-2,核酶(ribozyme),紫杉醇,耐药
Bcl-2,覈酶(ribozyme),紫杉醇,耐藥
Bcl-2,핵매(ribozyme),자삼순,내약
用核酶技术阻断或降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达以促进化疗药物紫杉醇诱导的食管癌细胞凋亡，探索克服耐药、提高紫杉醇疗效的新途径.将特异性切割Bcl-2 mRNA的核酶克隆至含MTⅡ启动子并可为ZnSO4S04诱导表达的真核表达载体中，通过脂质体转入食管癌鳞状上皮细胞系Eca 109中，经G418筛选得到稳定抗性细胞株X109R，挑取单细胞株扩大培养，140μmol/L ZnSO4诱导3 d，用Northern-blot、免疫荧光、流式细胞仪鉴定核酶及Bcl-2蛋白表达情况，用TUNEL标记及流式细胞术检测凋亡细胞的比例.bcl-2核酶在不同单细胞株中有不同程度的表达，其中一株X109R14表达最高.测定其中Ecl-2蛋白含量，发现Bcl-2蛋白表达大为降低.加入紫杉醇后，TUNEL标记及凋亡峰测定结果都表明同一条件下凋亡率升高.结果提示，转入特异性切割bcl-2mRNA的核酶可有效地阻断Bcl-2蛋白合成.Bcl-2蛋白表达降低可明显促进紫杉醇诱导的细胞凋亡.说明Bcl-2蛋白在细胞产生耐药过程中起着重要作用.
用覈酶技術阻斷或降低抗凋亡蛋白Bcl-2的錶達以促進化療藥物紫杉醇誘導的食管癌細胞凋亡，探索剋服耐藥、提高紫杉醇療效的新途徑.將特異性切割Bcl-2 mRNA的覈酶剋隆至含MTⅡ啟動子併可為ZnSO4S04誘導錶達的真覈錶達載體中，通過脂質體轉入食管癌鱗狀上皮細胞繫Eca 109中，經G418篩選得到穩定抗性細胞株X109R，挑取單細胞株擴大培養，140μmol/L ZnSO4誘導3 d，用Northern-blot、免疫熒光、流式細胞儀鑒定覈酶及Bcl-2蛋白錶達情況，用TUNEL標記及流式細胞術檢測凋亡細胞的比例.bcl-2覈酶在不同單細胞株中有不同程度的錶達，其中一株X109R14錶達最高.測定其中Ecl-2蛋白含量，髮現Bcl-2蛋白錶達大為降低.加入紫杉醇後，TUNEL標記及凋亡峰測定結果都錶明同一條件下凋亡率升高.結果提示，轉入特異性切割bcl-2mRNA的覈酶可有效地阻斷Bcl-2蛋白閤成.Bcl-2蛋白錶達降低可明顯促進紫杉醇誘導的細胞凋亡.說明Bcl-2蛋白在細胞產生耐藥過程中起著重要作用.
용핵매기술조단혹강저항조망단백Bcl-2적표체이촉진화료약물자삼순유도적식관암세포조망，탐색극복내약、제고자삼순료효적신도경.장특이성절할Bcl-2 mRNA적핵매극륭지함MTⅡ계동자병가위ZnSO4S04유도표체적진핵표체재체중，통과지질체전입식관암린상상피세포계Eca 109중，경G418사선득도은정항성세포주X109R，도취단세포주확대배양，140μmol/L ZnSO4유도3 d，용Northern-blot、면역형광、류식세포의감정핵매급Bcl-2단백표체정황，용TUNEL표기급류식세포술검측조망세포적비례.bcl-2핵매재불동단세포주중유불동정도적표체，기중일주X109R14표체최고.측정기중Ecl-2단백함량，발현Bcl-2단백표체대위강저.가입자삼순후，TUNEL표기급조망봉측정결과도표명동일조건하조망솔승고.결과제시，전입특이성절할bcl-2mRNA적핵매가유효지조단Bcl-2단백합성.Bcl-2단백표체강저가명현촉진자삼순유도적세포조망.설명Bcl-2단백재세포산생내약과정중기착중요작용.
