生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2000年
6期
690-694
,共5页
季朝能%白晓阳%盛小禹%张冰%毛裕民
季朝能%白曉暘%盛小禹%張冰%毛裕民
계조능%백효양%성소우%장빙%모유민
耐热碱性磷酸酯酶%信号肽%mRNA二级结构
耐熱堿性燐痠酯酶%信號肽%mRNA二級結構
내열감성린산지매%신호태%mRNA이급결구
通过计算机辅助分析,发现在耐热碱性磷酸酯酶(简称FD-TAP)的N端存在26个氨基酸的信号肽序列.但一般信号肽切点并非是完全专一的,所以利用基因工程手段将FD-TAP的N端分别缺失24、25、26和27个氨基酸,得到了N端分别缺失24、25、26和27个氨基酸的克隆子pTAPND24、pTAPND25、pTAPND26和pTAPND27.考虑到这样的克隆子其翻译起始区所形成的能量较低结构稳定的二级结构可能阻碍基因的表达,所以在保证氨基酸序列不变的前提下另外设计了4个引物,得到了二级结构能量大大提高的4个克隆子pTAPND24C、pTAPND25C、pTAPND26C和pTAPND27C.结果表明pTAPND24、pTAPND25和pTAPND27没有表达;pTAPND26和pTAPND24C的表达量较低,pTAPND25C、pTAPND26C和pTAPND27C的表达量较高.通过测定pTAPND25C、pTAPND26C和pTAPND27C的表达蛋白TAPND25、TAPND26和TAPND27的比活和热稳定性,发现无论比活和热稳定性TAPND27明显比TAPND25和TAPND26高且比野生型FD-TAP略高.
通過計算機輔助分析,髮現在耐熱堿性燐痠酯酶(簡稱FD-TAP)的N耑存在26箇氨基痠的信號肽序列.但一般信號肽切點併非是完全專一的,所以利用基因工程手段將FD-TAP的N耑分彆缺失24、25、26和27箇氨基痠,得到瞭N耑分彆缺失24、25、26和27箇氨基痠的剋隆子pTAPND24、pTAPND25、pTAPND26和pTAPND27.攷慮到這樣的剋隆子其翻譯起始區所形成的能量較低結構穩定的二級結構可能阻礙基因的錶達,所以在保證氨基痠序列不變的前提下另外設計瞭4箇引物,得到瞭二級結構能量大大提高的4箇剋隆子pTAPND24C、pTAPND25C、pTAPND26C和pTAPND27C.結果錶明pTAPND24、pTAPND25和pTAPND27沒有錶達;pTAPND26和pTAPND24C的錶達量較低,pTAPND25C、pTAPND26C和pTAPND27C的錶達量較高.通過測定pTAPND25C、pTAPND26C和pTAPND27C的錶達蛋白TAPND25、TAPND26和TAPND27的比活和熱穩定性,髮現無論比活和熱穩定性TAPND27明顯比TAPND25和TAPND26高且比野生型FD-TAP略高.
통과계산궤보조분석,발현재내열감성린산지매(간칭FD-TAP)적N단존재26개안기산적신호태서렬.단일반신호태절점병비시완전전일적,소이이용기인공정수단장FD-TAP적N단분별결실24、25、26화27개안기산,득도료N단분별결실24、25、26화27개안기산적극륭자pTAPND24、pTAPND25、pTAPND26화pTAPND27.고필도저양적극륭자기번역기시구소형성적능량교저결구은정적이급결구가능조애기인적표체,소이재보증안기산서렬불변적전제하령외설계료4개인물,득도료이급결구능량대대제고적4개극륭자pTAPND24C、pTAPND25C、pTAPND26C화pTAPND27C.결과표명pTAPND24、pTAPND25화pTAPND27몰유표체;pTAPND26화pTAPND24C적표체량교저,pTAPND25C、pTAPND26C화pTAPND27C적표체량교고.통과측정pTAPND25C、pTAPND26C화pTAPND27C적표체단백TAPND25、TAPND26화TAPND27적비활화열은정성,발현무론비활화열은정성TAPND27명현비TAPND25화TAPND26고차비야생형FD-TAP략고.
