第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2005年
18期
1837-1840
,共4页
何仰东%姜曼%倪兵%吴玉章
何仰東%薑曼%倪兵%吳玉章
하앙동%강만%예병%오옥장
SARS-CoV%S1蛋白%真核表达系统%甲醇营养型酵母
SARS-CoV%S1蛋白%真覈錶達繫統%甲醇營養型酵母
SARS-CoV%S1단백%진핵표체계통%갑순영양형효모
目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能.方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,经过酶切和测序鉴定后,通过电穿孔法将重组质粒S1-pMETαA转化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的诱导下表达目的蛋白.最后用覆盖分析法对重组转化子初步分析,SDS-PAGE和Wesntern blotting法鉴定目的蛋白的表达和特异性.结果酶切鉴定和测序结果证实了S1基因成功地克隆到pMETαA载体中;覆盖分析、SDS-PAGE和免疫印迹法证实S1基因得到正确的表达.结论利用酵母表达系统,成功地克隆和表达了SARS-CoV S1蛋白,为进一步纯化该蛋白和研究其功能奠定了基础.
目的穫得保持生物學活性、易于純化、高產量的嚴重急性呼吸道綜閤徵冠狀病毒(severe acute respiratory syndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便進一步研究S1蛋白及其抗體的功能.方法將SARS-CoV S1基因重組入酵母錶達載體pMETαA,經過酶切和測序鑒定後,通過電穿孔法將重組質粒S1-pMETαA轉化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的誘導下錶達目的蛋白.最後用覆蓋分析法對重組轉化子初步分析,SDS-PAGE和Wesntern blotting法鑒定目的蛋白的錶達和特異性.結果酶切鑒定和測序結果證實瞭S1基因成功地剋隆到pMETαA載體中;覆蓋分析、SDS-PAGE和免疫印跡法證實S1基因得到正確的錶達.結論利用酵母錶達繫統,成功地剋隆和錶達瞭SARS-CoV S1蛋白,為進一步純化該蛋白和研究其功能奠定瞭基礎.
목적획득보지생물학활성、역우순화、고산량적엄중급성호흡도종합정관상병독(severe acute respiratory syndrom coronavirus,SARS-CoV)S1단백,이편진일보연구S1단백급기항체적공능.방법장SARS-CoV S1기인중조입효모표체재체pMETαA,경과매절화측서감정후,통과전천공법장중조질립S1-pMETαA전화입숙주효모균주PMAD11,사기재갑순적유도하표체목적단백.최후용복개분석법대중조전화자초보분석,SDS-PAGE화Wesntern blotting법감정목적단백적표체화특이성.결과매절감정화측서결과증실료S1기인성공지극륭도pMETαA재체중;복개분석、SDS-PAGE화면역인적법증실S1기인득도정학적표체.결론이용효모표체계통,성공지극륭화표체료SARS-CoV S1단백,위진일보순화해단백화연구기공능전정료기출.
