细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
3期
283-285
,共3页
宁寒冰%赵丽娜%李婷婷%王晓霞%李继昌%刘志国%樊代明
寧寒冰%趙麗娜%李婷婷%王曉霞%李繼昌%劉誌國%樊代明
저한빙%조려나%리정정%왕효하%리계창%류지국%번대명
腺病毒%同源重组%趋化因子%crg-2
腺病毒%同源重組%趨化因子%crg-2
선병독%동원중조%추화인자%crg-2
目的:利用腺病毒的细菌重组系统表达同时具有免疫趋化及血管抑制活性的趋化性细胞因子Crg-2重组蛋白.方法:首先在大肠杆菌BJ5183中将穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与AdE1区基因缺失的骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,筛选后脂质体法转染入具有AdE1区组成性表达的293包装细胞中进行病毒包装、扩增;Western blot检测病毒感染293细胞的蛋白表达;趋化实验检测感染细胞上清对激活T淋巴细胞的趋化活性.结果:穿梭质粒pShuttle-cmv/crg-2与骨架质粒pAdEasy-1重组后,经酶切及PCR鉴定获得重组腺病毒基因组质粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2经包装并扩增后,用组织培养感染半数剂量法(TCID50)法测定病毒滴度达4×109TCID50/L,感染细胞经Western blot检测有一接近Mr10 000蛋白条带,分泌上清对激活的脾淋巴细胞有明显的趋化作用.结论:采用细菌重组法成功获得重组腺病毒Ad/crg2,可高效表达趋化性细胞因子Crg-2.
目的:利用腺病毒的細菌重組繫統錶達同時具有免疫趨化及血管抑製活性的趨化性細胞因子Crg-2重組蛋白.方法:首先在大腸桿菌BJ5183中將穿梭質粒pShuttle-cmv/crg-2與AdE1區基因缺失的骨架質粒pAdEasy-1進行同源重組,篩選後脂質體法轉染入具有AdE1區組成性錶達的293包裝細胞中進行病毒包裝、擴增;Western blot檢測病毒感染293細胞的蛋白錶達;趨化實驗檢測感染細胞上清對激活T淋巴細胞的趨化活性.結果:穿梭質粒pShuttle-cmv/crg-2與骨架質粒pAdEasy-1重組後,經酶切及PCR鑒定穫得重組腺病毒基因組質粒pAd/crg-2;病毒Ad/crg-2經包裝併擴增後,用組織培養感染半數劑量法(TCID50)法測定病毒滴度達4×109TCID50/L,感染細胞經Western blot檢測有一接近Mr10 000蛋白條帶,分泌上清對激活的脾淋巴細胞有明顯的趨化作用.結論:採用細菌重組法成功穫得重組腺病毒Ad/crg2,可高效錶達趨化性細胞因子Crg-2.
목적:이용선병독적세균중조계통표체동시구유면역추화급혈관억제활성적추화성세포인자Crg-2중조단백.방법:수선재대장간균BJ5183중장천사질립pShuttle-cmv/crg-2여AdE1구기인결실적골가질립pAdEasy-1진행동원중조,사선후지질체법전염입구유AdE1구조성성표체적293포장세포중진행병독포장、확증;Western blot검측병독감염293세포적단백표체;추화실험검측감염세포상청대격활T림파세포적추화활성.결과:천사질립pShuttle-cmv/crg-2여골가질립pAdEasy-1중조후,경매절급PCR감정획득중조선병독기인조질립pAd/crg-2;병독Ad/crg-2경포장병확증후,용조직배양감염반수제량법(TCID50)법측정병독적도체4×109TCID50/L,감염세포경Western blot검측유일접근Mr10 000단백조대,분비상청대격활적비림파세포유명현적추화작용.결론:채용세균중조법성공획득중조선병독Ad/crg2,가고효표체추화성세포인자Crg-2.
