中国皮肤性病学杂志
中國皮膚性病學雜誌
중국피부성병학잡지
THE CHINESE JOURNAL OF DERMATOVENEREOLOGY
2007年
1期
17-18,27
,共3页
牛军州%姜昌丽%齐显龙%孙东杰%高天文
牛軍州%薑昌麗%齊顯龍%孫東傑%高天文
우군주%강창려%제현룡%손동걸%고천문
Dickkopf1(Dkk1)%重组质粒
Dickkopf1(Dkk1)%重組質粒
Dickkopf1(Dkk1)%중조질립
目的 构建人源dickkopf 1(dkk1)基因的原核表达质粒,表达、纯化、鉴定其表达产物.方法 自足底皮肤组织提取成纤维细胞,抽提mRNA,RT-PCR获得人源dkk1基因片断,构建重组质粒PQE30-dkk1;转化至大肠杆菌内,诱导表达,超声裂菌、镍琼脂糖凝胶层析纯化表达产物,SDS-PAGE电泳、Western Blot鉴定表达产物.结果 RT-PCR获得片断与预期结果相符,双酶切鉴定、测序鉴定证实重组质粒PQE30-dkk1构建成功;SDS-PAGE电泳、抗Dkk1抗体Western Blot鉴定表达产物为Dkk1蛋白.结论 成功构建了人源dkk1的原核表达质粒,并表达、纯化、鉴定了该基因的原核表达产物,为下一步的Dkk1蛋白对皮肤黑素细胞的生物学活性研究奠定基础.
目的 構建人源dickkopf 1(dkk1)基因的原覈錶達質粒,錶達、純化、鑒定其錶達產物.方法 自足底皮膚組織提取成纖維細胞,抽提mRNA,RT-PCR穫得人源dkk1基因片斷,構建重組質粒PQE30-dkk1;轉化至大腸桿菌內,誘導錶達,超聲裂菌、鎳瓊脂糖凝膠層析純化錶達產物,SDS-PAGE電泳、Western Blot鑒定錶達產物.結果 RT-PCR穫得片斷與預期結果相符,雙酶切鑒定、測序鑒定證實重組質粒PQE30-dkk1構建成功;SDS-PAGE電泳、抗Dkk1抗體Western Blot鑒定錶達產物為Dkk1蛋白.結論 成功構建瞭人源dkk1的原覈錶達質粒,併錶達、純化、鑒定瞭該基因的原覈錶達產物,為下一步的Dkk1蛋白對皮膚黑素細胞的生物學活性研究奠定基礎.
목적 구건인원dickkopf 1(dkk1)기인적원핵표체질립,표체、순화、감정기표체산물.방법 자족저피부조직제취성섬유세포,추제mRNA,RT-PCR획득인원dkk1기인편단,구건중조질립PQE30-dkk1;전화지대장간균내,유도표체,초성렬균、얼경지당응효층석순화표체산물,SDS-PAGE전영、Western Blot감정표체산물.결과 RT-PCR획득편단여예기결과상부,쌍매절감정、측서감정증실중조질립PQE30-dkk1구건성공;SDS-PAGE전영、항Dkk1항체Western Blot감정표체산물위Dkk1단백.결론 성공구건료인원dkk1적원핵표체질립,병표체、순화、감정료해기인적원핵표체산물,위하일보적Dkk1단백대피부흑소세포적생물학활성연구전정기출.
