生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2007年
6期
918-920
,共3页
高雪%薛赢%孙景豫%邱建华
高雪%薛贏%孫景豫%邱建華
고설%설영%손경예%구건화
cysteine rich protein 2%RT-PCR%表达%纯化
cysteine rich protein 2%RT-PCR%錶達%純化
cysteine rich protein 2%RT-PCR%표체%순화
目的:获得小鼠CSRP2(cysteine rich protein 2)基因片段,高效表达、纯化CSRP2.方法:用RT-PCR技术从小鼠心脏组织中提取总DNA并扩增出相应大小的CSRP2 DNA片段,将其与pGEM-T-easy载体连接后测序,将测序正确的CSRP2从BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET-A,将连接产物转化大肠杆菌BL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白,对重组融合蛋白通过镍柱进行纯化.结果与结论:PCR获得的CSRP2序列与GenBank报道的一致(为675 bp);重组载体在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达;融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子质量约24×103处有特异的蛋白条带,目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的25%;重组蛋白经镍柱纯化后,得到了高纯度的CSRP2融合蛋白.
目的:穫得小鼠CSRP2(cysteine rich protein 2)基因片段,高效錶達、純化CSRP2.方法:用RT-PCR技術從小鼠心髒組織中提取總DNA併擴增齣相應大小的CSRP2 DNA片段,將其與pGEM-T-easy載體連接後測序,將測序正確的CSRP2從BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位點剋隆入原覈錶達載體pRSET-A,將連接產物轉化大腸桿菌BL21,挑齣暘性剋隆,IPTG誘導錶達重組的6×His融閤蛋白,對重組融閤蛋白通過鎳柱進行純化.結果與結論:PCR穫得的CSRP2序列與GenBank報道的一緻(為675 bp);重組載體在大腸桿菌BL21中以包涵體形式高效錶達;融閤蛋白經SDS-PAGE和Western blot分析,在相對分子質量約24×103處有特異的蛋白條帶,目的蛋白錶達量佔菌體總蛋白量的25%;重組蛋白經鎳柱純化後,得到瞭高純度的CSRP2融閤蛋白.
목적:획득소서CSRP2(cysteine rich protein 2)기인편단,고효표체、순화CSRP2.방법:용RT-PCR기술종소서심장조직중제취총DNA병확증출상응대소적CSRP2 DNA편단,장기여pGEM-T-easy재체련접후측서,장측서정학적CSRP2종BamH Ⅰ화HindⅢ매절위점극륭입원핵표체재체pRSET-A,장련접산물전화대장간균BL21,도출양성극륭,IPTG유도표체중조적6×His융합단백,대중조융합단백통과얼주진행순화.결과여결론:PCR획득적CSRP2서렬여GenBank보도적일치(위675 bp);중조재체재대장간균BL21중이포함체형식고효표체;융합단백경SDS-PAGE화Western blot분석,재상대분자질량약24×103처유특이적단백조대,목적단백표체량점균체총단백량적25%;중조단백경얼주순화후,득도료고순도적CSRP2융합단백.
