南通大学学报（医学版）
南通大學學報（醫學版）
남통대학학보（의학판）
JOURNAL OF NANTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2007年
6期
461-464
,共4页
吴欣%邵晨昕%顾芸%丁斐%刘梅
吳訢%邵晨昕%顧蕓%丁斐%劉梅
오흔%소신흔%고예%정비%류매
Myostatin%RNA干扰%C2C12
Myostatin%RNA榦擾%C2C12
Myostatin%RNA간우%C2C12
目的:研究Myostatin干扰质粒在小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12细胞中的沉默作用.方法:根据Myostatin mRNA序列,选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链以及1个无干扰作用DNA链,退火后插入pSilencer2.1-U6表达载体,构建3个RNAi阳性质粒:M1/pSilencer、M2/pSilencer、M3/pSilencer及一个阴性质粒Mc/pSisencer并转染C2C12细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot观察RNAi对C2C12细胞中Myostatin mRNA和蛋白表达的下调作用.结果:构建的3个阳性干扰质粒中M1/pSilencer能显著降低C2C12细胞中Myostatin表达量,随着M1/pSilencer干扰质粒剂量的增加,Myostatin表达量逐渐降低.结论:成功构建Myostatin RNAi质粒,该质粒能下调目的基因Myostatin在C2C12细胞中的表达量.
目的:研究Myostatin榦擾質粒在小鼠骨骼肌成肌細胞繫C2C12細胞中的沉默作用.方法:根據Myostatin mRNA序列,選擇3箇19nts的靶序列,設計併閤成包含各正反義靶序列的互補DNA鏈以及1箇無榦擾作用DNA鏈,退火後插入pSilencer2.1-U6錶達載體,構建3箇RNAi暘性質粒:M1/pSilencer、M2/pSilencer、M3/pSilencer及一箇陰性質粒Mc/pSisencer併轉染C2C12細胞,採用實時熒光定量PCR和Western blot觀察RNAi對C2C12細胞中Myostatin mRNA和蛋白錶達的下調作用.結果:構建的3箇暘性榦擾質粒中M1/pSilencer能顯著降低C2C12細胞中Myostatin錶達量,隨著M1/pSilencer榦擾質粒劑量的增加,Myostatin錶達量逐漸降低.結論:成功構建Myostatin RNAi質粒,該質粒能下調目的基因Myostatin在C2C12細胞中的錶達量.
목적:연구Myostatin간우질립재소서골격기성기세포계C2C12세포중적침묵작용.방법:근거Myostatin mRNA서렬,선택3개19nts적파서렬,설계병합성포함각정반의파서렬적호보DNA련이급1개무간우작용DNA련,퇴화후삽입pSilencer2.1-U6표체재체,구건3개RNAi양성질립:M1/pSilencer、M2/pSilencer、M3/pSilencer급일개음성질립Mc/pSisencer병전염C2C12세포,채용실시형광정량PCR화Western blot관찰RNAi대C2C12세포중Myostatin mRNA화단백표체적하조작용.결과:구건적3개양성간우질립중M1/pSilencer능현저강저C2C12세포중Myostatin표체량,수착M1/pSilencer간우질립제량적증가,Myostatin표체량축점강저.결론:성공구건Myostatin RNAi질립,해질립능하조목적기인Myostatin재C2C12세포중적표체량.
