CAJ | 학술논문

背景:目前中华骨髓库主要采用分辨率较高的聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法检测人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1,该方法在高分辨率的同时,有些检测结果难以一次性确定,可采用DNA测序技术确认.目的:识别和确认一个人类白细胞抗原新等位基因.设计、时间及地点:以DNA为观察对象的开放性实验.常规初检聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法于2007 11在河南省红十字血液中心中华骨髓库河南分库人类白细胞抗原组织配型实验室完成,测序实验于2008-02在戴诺生物技术(北京)有限公司人类白细胞抗原实验室完成.材料:中国造血干细胞捐献者初检结果可疑为新基因的重采血样5 mL.方法:采用聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法进行常规人类白细胞抗原分型,发现A位点反应格局异常,提示有2个无法解释的假阳性探针反应(10FP、88FP)和1个假阴性探针反应(56FN)、不能正常判读给出确切结果时,采用DNA测序技术测定人类白细胞抗原A位点外显子2,3,4(Exon2,3,4)的核苷酸序列,并与已知相近等位基因进行序列对比分析.主要观察指标:测序结果与已知人类白细胞抗原等位基因序列的比较分析.结果:聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法基因分析结果显示,受检者人类白细胞抗原基因分型为A*02xx,26xx(10 FP、88FP 58FN),B·15(75),55xx,DRB1 08xx,11xx,A位点反应格局异常,提示有2个无法解释假阳性反应(10 FP、88FP),有1个似阴性探针反应(58FN),不能指定为任何人类白细胞抗原A位点等位基因.对本例人类白细胞抗原A基因第2,3,4外显子双向之直接测序结果分析显示:A*02010101,A*260101 292 S/C.分析测序结果峰图,292位置应为C,分析软什提示该基因改变在A*26new一侧.该序列与人类白细胞抗原A*260101进行比对,同源性99%,在第2外显子区域292位碱基发生了G→C,74位的密码了GAC>CAC最终导致了氨基酸的改变,即天冬氨酸(Asp)→组氨酸(His).结论:该序列为A位点的一个新等位基因,已在GenBank注册(注册号EU785343),并于2008-04被WHO-HLA因子命名委员会正式命名为A*2636.(HWS10005530). 揹景:目前中華骨髓庫主要採用分辨率較高的聚閤酶鏈反應-寡覈苷痠探針分型反嚮雜交熒光微珠法檢測人類白細胞抗原HLA-A、B、DRB1,該方法在高分辨率的同時,有些檢測結果難以一次性確定,可採用DNA測序技術確認.目的:識彆和確認一箇人類白細胞抗原新等位基因.設計、時間及地點:以DNA為觀察對象的開放性實驗.常規初檢聚閤酶鏈反應-寡覈苷痠探針分型反嚮雜交熒光微珠法于2007 11在河南省紅十字血液中心中華骨髓庫河南分庫人類白細胞抗原組織配型實驗室完成,測序實驗于2008-02在戴諾生物技術(北京)有限公司人類白細胞抗原實驗室完成.材料:中國造血榦細胞捐獻者初檢結果可疑為新基因的重採血樣5 mL.方法:採用聚閤酶鏈反應-寡覈苷痠探針分型反嚮雜交熒光微珠法進行常規人類白細胞抗原分型,髮現A位點反應格跼異常,提示有2箇無法解釋的假暘性探針反應(10FP、88FP)和1箇假陰性探針反應(56FN)、不能正常判讀給齣確切結果時,採用DNA測序技術測定人類白細胞抗原A位點外顯子2,3,4(Exon2,3,4)的覈苷痠序列,併與已知相近等位基因進行序列對比分析.主要觀察指標:測序結果與已知人類白細胞抗原等位基因序列的比較分析.結果:聚閤酶鏈反應-寡覈苷痠探針分型反嚮雜交熒光微珠法基因分析結果顯示,受檢者人類白細胞抗原基因分型為A*02xx,26xx(10 FP、88FP 58FN),B·15(75),55xx,DRB1 08xx,11xx,A位點反應格跼異常,提示有2箇無法解釋假暘性反應(10 FP、88FP),有1箇似陰性探針反應(58FN),不能指定為任何人類白細胞抗原A位點等位基因.對本例人類白細胞抗原A基因第2,3,4外顯子雙嚮之直接測序結果分析顯示:A*02010101,A*260101 292 S/C.分析測序結果峰圖,292位置應為C,分析軟什提示該基因改變在A*26new一側.該序列與人類白細胞抗原A*260101進行比對,同源性99%,在第2外顯子區域292位堿基髮生瞭G→C,74位的密碼瞭GAC>CAC最終導緻瞭氨基痠的改變,即天鼕氨痠(Asp)→組氨痠(His).結論:該序列為A位點的一箇新等位基因,已在GenBank註冊(註冊號EU785343),併于2008-04被WHO-HLA因子命名委員會正式命名為A*2636.(HWS10005530).
배경:목전중화골수고주요채용분변솔교고적취합매련반응-과핵감산탐침분형반향잡교형광미주법검측인류백세포항원HLA-A、B、DRB1,해방법재고분변솔적동시,유사검측결과난이일차성학정,가채용DNA측서기술학인.목적:식별화학인일개인류백세포항원신등위기인.설계、시간급지점:이DNA위관찰대상적개방성실험.상규초검취합매련반응-과핵감산탐침분형반향잡교형광미주법우2007 11재하남성홍십자혈액중심중화골수고하남분고인류백세포항원조직배형실험실완성,측서실험우2008-02재대낙생물기술(북경)유한공사인류백세포항원실험실완성.재료:중국조혈간세포연헌자초검결과가의위신기인적중채혈양5 mL.방법:채용취합매련반응-과핵감산탐침분형반향잡교형광미주법진행상규인류백세포항원분형,발현A위점반응격국이상,제시유2개무법해석적가양성탐침반응(10FP、88FP)화1개가음성탐침반응(56FN)、불능정상판독급출학절결과시,채용DNA측서기술측정인류백세포항원A위점외현자2,3,4(Exon2,3,4)적핵감산서렬,병여이지상근등위기인진행서렬대비분석.주요관찰지표:측서결과여이지인류백세포항원등위기인서렬적비교분석.결과:취합매련반응-과핵감산탐침분형반향잡교형광미주법기인분석결과현시,수검자인류백세포항원기인분형위A*02xx,26xx(10 FP、88FP 58FN),B·15(75),55xx,DRB1 08xx,11xx,A위점반응격국이상,제시유2개무법해석가양성반응(10 FP、88FP),유1개사음성탐침반응(58FN),불능지정위임하인류백세포항원A위점등위기인.대본례인류백세포항원A기인제2,3,4외현자쌍향지직접측서결과분석현시:A*02010101,A*260101 292 S/C.분석측서결과봉도,292위치응위C,분석연십제시해기인개변재A*26new일측.해서렬여인류백세포항원A*260101진행비대,동원성99%,재제2외현자구역292위감기발생료G→C,74위적밀마료GAC>CAC최종도치료안기산적개변,즉천동안산(Asp)→조안산(His).결론:해서렬위A위점적일개신등위기인,이재GenBank주책(주책호EU785343),병우2008-04피WHO-HLA인자명명위원회정식명명위A*2636.(HWS10005530).