广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
2期
149-151
,共3页
吴文新%付玉华%沈玉光%张逊%田刚%李书军
吳文新%付玉華%瀋玉光%張遜%田剛%李書軍
오문신%부옥화%침옥광%장손%전강%리서군
食管癌%MicroRNA%真核表达载体%pcDNA3.1(+)
食管癌%MicroRNA%真覈錶達載體%pcDNA3.1(+)
식관암%MicroRNA%진핵표체재체%pcDNA3.1(+)
目的 构建miR-181a真核表达载体,获得食管癌细胞TE11在其中稳定表达的细胞系,为研究miR-181a的功能以及其在食管癌细胞TE11中的作用机制奠定基础.方法 根据miR-181a成熟序列在基因组中的位置及其上下游250个碱基序列,以293T细胞基因组DNA为模板设计PCR引物,扩增包含miR-181a前体的序列,连接到线性化的pMD18-T Simple载体中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后亚克隆到pcDNA3.1(+)中,并对重组质粒进行双酶切和测序分析;鉴定完全正确的重组质粒转染食管癌细胞TE11,用G418(350 mg/L)筛选4周获得miR-181a稳定表达细胞系TE11-miR-181a,提取TE11-miR-181a细胞总RNA,用real-time PCR鉴定pcDNA3.1(+)-miR-181a可在真核细胞中稳定过表达.结果 成功构建了miR-181a的真核表达载体,并获得了在TE11细胞中稳定表达重组质粒的细胞系TE11-miR-181a.结论 miR-181a真核表达载体在食管癌细胞TE11中稳定高表达,为进一步研究miR-181a在食管癌细胞TE11中的功能及基因调控机制奠定了基础.
目的 構建miR-181a真覈錶達載體,穫得食管癌細胞TE11在其中穩定錶達的細胞繫,為研究miR-181a的功能以及其在食管癌細胞TE11中的作用機製奠定基礎.方法 根據miR-181a成熟序列在基因組中的位置及其上下遊250箇堿基序列,以293T細胞基因組DNA為模闆設計PCR引物,擴增包含miR-181a前體的序列,連接到線性化的pMD18-T Simple載體中,經BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切後亞剋隆到pcDNA3.1(+)中,併對重組質粒進行雙酶切和測序分析;鑒定完全正確的重組質粒轉染食管癌細胞TE11,用G418(350 mg/L)篩選4週穫得miR-181a穩定錶達細胞繫TE11-miR-181a,提取TE11-miR-181a細胞總RNA,用real-time PCR鑒定pcDNA3.1(+)-miR-181a可在真覈細胞中穩定過錶達.結果 成功構建瞭miR-181a的真覈錶達載體,併穫得瞭在TE11細胞中穩定錶達重組質粒的細胞繫TE11-miR-181a.結論 miR-181a真覈錶達載體在食管癌細胞TE11中穩定高錶達,為進一步研究miR-181a在食管癌細胞TE11中的功能及基因調控機製奠定瞭基礎.
목적 구건miR-181a진핵표체재체,획득식관암세포TE11재기중은정표체적세포계,위연구miR-181a적공능이급기재식관암세포TE11중적작용궤제전정기출.방법 근거miR-181a성숙서렬재기인조중적위치급기상하유250개감기서렬,이293T세포기인조DNA위모판설계PCR인물,확증포함miR-181a전체적서렬,련접도선성화적pMD18-T Simple재체중,경BamHⅠ화EcoRⅠ쌍매절후아극륭도pcDNA3.1(+)중,병대중조질립진행쌍매절화측서분석;감정완전정학적중조질립전염식관암세포TE11,용G418(350 mg/L)사선4주획득miR-181a은정표체세포계TE11-miR-181a,제취TE11-miR-181a세포총RNA,용real-time PCR감정pcDNA3.1(+)-miR-181a가재진핵세포중은정과표체.결과 성공구건료miR-181a적진핵표체재체,병획득료재TE11세포중은정표체중조질립적세포계TE11-miR-181a.결론 miR-181a진핵표체재체재식관암세포TE11중은정고표체,위진일보연구miR-181a재식관암세포TE11중적공능급기인조공궤제전정료기출.
