中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
7期
1199-1204
,共6页
吕志强%吴毅梅%江山平%张蔚%黄林洁
呂誌彊%吳毅梅%江山平%張蔚%黃林潔
려지강%오의매%강산평%장위%황림길
反转录病毒%RNA干扰%RBL-2H3细胞%瞬时感受器电位M7通道%心脏%组织工程
反轉錄病毒%RNA榦擾%RBL-2H3細胞%瞬時感受器電位M7通道%心髒%組織工程
반전록병독%RNA간우%RBL-2H3세포%순시감수기전위M7통도%심장%조직공정
背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用.瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道.目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响.方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3) 采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率.筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果.检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变.结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P < 0.05).pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P < 0.05).结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化.
揹景:鈣離子在肥大細胞活化後的脫顆粒反應起重要作用.瞬時感受器電位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)是肥大細胞重要的候選通道.目的:構建攜帶大鼠靶嚮TRPM7-siRNA的反轉錄病毒載體併檢測其對大鼠RBL-2H3細胞抗原活化的影響.方法:實驗設計3箇TRPM7-siRNA序列和1箇無關對照序列,剋隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反轉錄病毒載體,用重組質粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3) 採用脂質體Lipofectamine 2000轉染RBL-2H3細胞,採用Western blot檢測榦擾效率.篩選齣最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7與包裝質粒共轉染293FT細胞生成反轉錄病毒併感染RBL-2H3細胞,熒光實時定量PCR及Western blot檢測TRPM7-siRNA的沉默效果.檢測β-氨基已糖苷酶活性探討RBL-2H3細胞抗原活化程度的改變.結果與結論:轉染後的各組細胞中siTRPM7-3轉染組的沉默效率最高(P < 0.05).pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3榦擾組的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平顯著下調,緻敏後其β-氨基已糖苷酶活性明顯降低(P < 0.05).結果提示,降低TRPM7基因的錶達可抑製RBL-2H3細胞的抗原活化.
배경:개리자재비대세포활화후적탈과립반응기중요작용.순시감수기전위M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)시비대세포중요적후선통도.목적:구건휴대대서파향TRPM7-siRNA적반전록병독재체병검측기대대서RBL-2H3세포항원활화적영향.방법:실험설계3개TRPM7-siRNA서렬화1개무관대조서렬,극륭도매절적pSuper-retro-neo-GFP반전록병독재체,용중조질립pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3) 채용지질체Lipofectamine 2000전염RBL-2H3세포,채용Western blot검측간우효솔.사선출최유효적pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7여포장질립공전염293FT세포생성반전록병독병감염RBL-2H3세포,형광실시정량PCR급Western blot검측TRPM7-siRNA적침묵효과.검측β-안기이당감매활성탐토RBL-2H3세포항원활화정도적개변.결과여결론:전염후적각조세포중siTRPM7-3전염조적침묵효솔최고(P < 0.05).pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3간우조적TRPM7기인적mRNA수평화단백수평현저하조,치민후기β-안기이당감매활성명현강저(P < 0.05).결과제시,강저TRPM7기인적표체가억제RBL-2H3세포적항원활화.
