安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
16期
8905-8907
,共3页
王青泉%武建明%李秀梅%王立群%何洪彬%王洪梅%刘晓
王青泉%武建明%李秀梅%王立群%何洪彬%王洪梅%劉曉
왕청천%무건명%리수매%왕립군%하홍빈%왕홍매%류효
t-PA%原核表达%抗血清
t-PA%原覈錶達%抗血清
t-PA%원핵표체%항혈청
[目的]制备人组织型纤溶酶原激活剂t-PA(1354-1802)抗血清,并测定其效价,为深入研究t-PA基因功能奠定基础.[方法]利用基因克隆技术获得t-PA(1354-1802)催化域基因片段,然后将其重组到pET-32a(+)质粒中,进行鉴定及序列分析;将测序正确的阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导、蛋白纯化及免疫兔试验.[结果]SDS-PAGE结果显示,37 kD处出现特异性条带;对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备t-PA蛋白抗血清,Western blot分析表明,抗血清可与标准品t-PA蛋白特异性结合,间接ELJSA方法检测抗血清的效价可达到1∶12 800.[结论]成功制备了t-PA(1354-1802)抗血清,为t-PA基因功能的深入研究奠定了基础.
[目的]製備人組織型纖溶酶原激活劑t-PA(1354-1802)抗血清,併測定其效價,為深入研究t-PA基因功能奠定基礎.[方法]利用基因剋隆技術穫得t-PA(1354-1802)催化域基因片段,然後將其重組到pET-32a(+)質粒中,進行鑒定及序列分析;將測序正確的暘性質粒轉化大腸桿菌BL21感受態細胞,IPTG誘導、蛋白純化及免疫兔試驗.[結果]SDS-PAGE結果顯示,37 kD處齣現特異性條帶;對該融閤蛋白進行分離純化後免疫新西蘭兔,製備t-PA蛋白抗血清,Western blot分析錶明,抗血清可與標準品t-PA蛋白特異性結閤,間接ELJSA方法檢測抗血清的效價可達到1∶12 800.[結論]成功製備瞭t-PA(1354-1802)抗血清,為t-PA基因功能的深入研究奠定瞭基礎.
[목적]제비인조직형섬용매원격활제t-PA(1354-1802)항혈청,병측정기효개,위심입연구t-PA기인공능전정기출.[방법]이용기인극륭기술획득t-PA(1354-1802)최화역기인편단,연후장기중조도pET-32a(+)질립중,진행감정급서렬분석;장측서정학적양성질립전화대장간균BL21감수태세포,IPTG유도、단백순화급면역토시험.[결과]SDS-PAGE결과현시,37 kD처출현특이성조대;대해융합단백진행분리순화후면역신서란토,제비t-PA단백항혈청,Western blot분석표명,항혈청가여표준품t-PA단백특이성결합,간접ELJSA방법검측항혈청적효개가체도1∶12 800.[결론]성공제비료t-PA(1354-1802)항혈청,위t-PA기인공능적심입연구전정료기출.
