畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
8期
1273-1280
,共8页
黄小波%李春松%杨恒%曹三杰%文心田%廖晓丹%张鑫淼
黃小波%李春鬆%楊恆%曹三傑%文心田%廖曉丹%張鑫淼
황소파%리춘송%양항%조삼걸%문심전%료효단%장흠묘
减毒沙门氏菌%猪传染性胃肠炎病毒%融合双基因%构建%生物学特性
減毒沙門氏菌%豬傳染性胃腸炎病毒%融閤雙基因%構建%生物學特性
감독사문씨균%저전염성위장염병독%융합쌍기인%구건%생물학특성
旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础.采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2 kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N.将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207 (pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207 (pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定.结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207 (pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×10 9、1×10 9和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除.结果表明成功构建TGEV S/N双基因疫苗SL7207 (pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础.
旨在構建攜帶豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)S/N融閤雙基因的減毒沙門氏菌,併鑒定該疫苗菌株的生物學特性,為開展TGEV口服免疫研究奠定材料基礎.採用PCR方法從剋隆質粒19T-S和19T-N中分彆擴增瞭TGEV的S基因(含主要抗原位點,2.1kb)和N基因(1.2 kb),將S基因和N基因插入pVAX1載體,構建攜帶S/N融閤雙基因的真覈錶達質粒pVAX-S/N.將pVAX-S/N電轉化減毒沙門氏菌SL7207,篩選穫得重組菌株SL7207 (pVAX-S/N),併對重組菌株SL7207 (pVAX-S/N)的體外穩定性、目的基因在體內的轉錄、口服接種小鼠的安全性及在體內穩定性等特性進行瞭鑒定.結果錶明,真覈質粒pVAX-S/N構建成功,該質粒轉染COS7中能錶達2箇目的蛋白,重組菌SL7207 (pVAX-S/N)在Kan+抗性下體外培養穩定性好,口服接種小鼠3d可從迴腸組織檢測到目的基因的轉錄,以0.5×10 9、1×10 9和2×109 CFU口服對小鼠均具有安全性,重組菌在接種小鼠的肝、脾于4週左右逐漸被機體清除.結果錶明成功構建TGEV S/N雙基因疫苗SL7207 (pVAX-S/N),該疫苗具有良好的穩定性與安全性等特點,為開展TGEV口服免疫研究奠定瞭基礎.
지재구건휴대저전염성위장염병독(TGEV)S/N융합쌍기인적감독사문씨균,병감정해역묘균주적생물학특성,위개전TGEV구복면역연구전정재료기출.채용PCR방법종극륭질립19T-S화19T-N중분별확증료TGEV적S기인(함주요항원위점,2.1kb)화N기인(1.2 kb),장S기인화N기인삽입pVAX1재체,구건휴대S/N융합쌍기인적진핵표체질립pVAX-S/N.장pVAX-S/N전전화감독사문씨균SL7207,사선획득중조균주SL7207 (pVAX-S/N),병대중조균주SL7207 (pVAX-S/N)적체외은정성、목적기인재체내적전록、구복접충소서적안전성급재체내은정성등특성진행료감정.결과표명,진핵질립pVAX-S/N구건성공,해질립전염COS7중능표체2개목적단백,중조균SL7207 (pVAX-S/N)재Kan+항성하체외배양은정성호,구복접충소서3d가종회장조직검측도목적기인적전록,이0.5×10 9、1×10 9화2×109 CFU구복대소서균구유안전성,중조균재접충소서적간、비우4주좌우축점피궤체청제.결과표명성공구건TGEV S/N쌍기인역묘SL7207 (pVAX-S/N),해역묘구유량호적은정성여안전성등특점,위개전TGEV구복면역연구전정료기출.
