癌变·畸变·突变
癌變·畸變·突變
암변·기변·돌변
CARCINOGENSES,TERATOGENSIS AND MUTAGENESIS
2005年
4期
193-197
,共5页
黄天华%谢庆东%陈霓彤%曾曦凡%吴丛梅%王晓梅
黃天華%謝慶東%陳霓彤%曾晞凡%吳叢梅%王曉梅
황천화%사경동%진예동%증희범%오총매%왕효매
乙肝病毒基因%复制与表达%垂直传播%金黄地鼠
乙肝病毒基因%複製與錶達%垂直傳播%金黃地鼠
을간병독기인%복제여표체%수직전파%금황지서
背景与目的:乙型肝炎是危害人类健康的全球性疾病.本研究旨在探索乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)通过精子垂直传播的可能性.方法:将金黄地鼠精子与pBR322-HBV DNA重组质粒进行共培养后,与金黄地鼠正常卵母细胞受精,取2-细胞胚分别制片和提取RNA,用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)、RT-PCR和免疫荧光检测技术研究精子携带的HBV基因在胚胎细胞中的复制与表达.结果:①FISH:用全长HBV DNA探针与128个2-细胞胚进行FISH,其中3个胚胎FISH结果阳性,每个胚胎的2个间期核上均有HBV DNA杂交信号;②RT-PCR:在检测样本中可见特异的HBx DNA阳性条带,阴性对照1(模板为灭菌水)和阴性对照2(未加反转录酶)均为阴性;③免疫荧光检测:2-细胞胚经血清封闭后,分成两组.一组作检测样本,另一组用PBS代替一抗(小鼠抗人HBsAg)作为阴性对照,检测样本中可见阳性免疫荧光信号,阴性对照未见信号.结论:以精子为载体,携带到卵内的HBV基因能够在胚胎细胞中复制和表达,提示HBV能够通过男性生殖细胞由父亲垂直传递给子代.
揹景與目的:乙型肝炎是危害人類健康的全毬性疾病.本研究旨在探索乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)通過精子垂直傳播的可能性.方法:將金黃地鼠精子與pBR322-HBV DNA重組質粒進行共培養後,與金黃地鼠正常卵母細胞受精,取2-細胞胚分彆製片和提取RNA,用熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)、RT-PCR和免疫熒光檢測技術研究精子攜帶的HBV基因在胚胎細胞中的複製與錶達.結果:①FISH:用全長HBV DNA探針與128箇2-細胞胚進行FISH,其中3箇胚胎FISH結果暘性,每箇胚胎的2箇間期覈上均有HBV DNA雜交信號;②RT-PCR:在檢測樣本中可見特異的HBx DNA暘性條帶,陰性對照1(模闆為滅菌水)和陰性對照2(未加反轉錄酶)均為陰性;③免疫熒光檢測:2-細胞胚經血清封閉後,分成兩組.一組作檢測樣本,另一組用PBS代替一抗(小鼠抗人HBsAg)作為陰性對照,檢測樣本中可見暘性免疫熒光信號,陰性對照未見信號.結論:以精子為載體,攜帶到卵內的HBV基因能夠在胚胎細胞中複製和錶達,提示HBV能夠通過男性生殖細胞由父親垂直傳遞給子代.
배경여목적:을형간염시위해인류건강적전구성질병.본연구지재탐색을간병독(Hepatitis B virus,HBV)통과정자수직전파적가능성.방법:장금황지서정자여pBR322-HBV DNA중조질립진행공배양후,여금황지서정상란모세포수정,취2-세포배분별제편화제취RNA,용형광원위잡교(Fluorescence in situ hybridization,FISH)、RT-PCR화면역형광검측기술연구정자휴대적HBV기인재배태세포중적복제여표체.결과:①FISH:용전장HBV DNA탐침여128개2-세포배진행FISH,기중3개배태FISH결과양성,매개배태적2개간기핵상균유HBV DNA잡교신호;②RT-PCR:재검측양본중가견특이적HBx DNA양성조대,음성대조1(모판위멸균수)화음성대조2(미가반전록매)균위음성;③면역형광검측:2-세포배경혈청봉폐후,분성량조.일조작검측양본,령일조용PBS대체일항(소서항인HBsAg)작위음성대조,검측양본중가견양성면역형광신호,음성대조미견신호.결론:이정자위재체,휴대도란내적HBV기인능구재배태세포중복제화표체,제시HBV능구통과남성생식세포유부친수직전체급자대.
