第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2006年
9期
1023-1025
,共3页
毕霞%徐卫东%吴岳嵩%龚德军%袁扬%黄盛东
畢霞%徐衛東%吳嶽嵩%龔德軍%袁颺%黃盛東
필하%서위동%오악숭%공덕군%원양%황성동
骨形态发生蛋白质类%重组腺病毒%骨髓祖代细胞
骨形態髮生蛋白質類%重組腺病毒%骨髓祖代細胞
골형태발생단백질류%중조선병독%골수조대세포
目的:构建骨形态发生蛋白7(BMP-7)和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的重组腺病毒载体,并检测其在骨髓基质干细胞(BMSCs)的表达.方法:RT-PCR法获得BMP-7基因.将其克隆至pcDNA3.1/CT-GFP质粒中,PCR扩增hBMP-7/GFP融合基因片段,与线性化pAxCAwt腺病毒载体连接,转染大肠杆菌LE392,筛选重组腺病毒黏粒,大量扩增后与DNA-TPC共转HEK293细胞,获得重组腺病毒Ad.hBMP-7/GFP.用重组病毒液转染兔BMSCs细胞,免疫组化方法检测BMP-7的表达.结果:经过多聚酶链反应及酶切鉴定证明获得了BMP-7重组腺病毒基因组,并包装出重组腺病毒,滴度为4.4×108pfu/ml.荧光显微镜和免疫组织化学证明BMP-7在重组腺病毒转染后的BMSC细胞中得到了表达.结论:成功制备BMP-7重组腺病毒,为骨缺损局部基因治疗研究奠定基础.
目的:構建骨形態髮生蛋白7(BMP-7)和綠色熒光蛋白(GFP)融閤基因的重組腺病毒載體,併檢測其在骨髓基質榦細胞(BMSCs)的錶達.方法:RT-PCR法穫得BMP-7基因.將其剋隆至pcDNA3.1/CT-GFP質粒中,PCR擴增hBMP-7/GFP融閤基因片段,與線性化pAxCAwt腺病毒載體連接,轉染大腸桿菌LE392,篩選重組腺病毒黏粒,大量擴增後與DNA-TPC共轉HEK293細胞,穫得重組腺病毒Ad.hBMP-7/GFP.用重組病毒液轉染兔BMSCs細胞,免疫組化方法檢測BMP-7的錶達.結果:經過多聚酶鏈反應及酶切鑒定證明穫得瞭BMP-7重組腺病毒基因組,併包裝齣重組腺病毒,滴度為4.4×108pfu/ml.熒光顯微鏡和免疫組織化學證明BMP-7在重組腺病毒轉染後的BMSC細胞中得到瞭錶達.結論:成功製備BMP-7重組腺病毒,為骨缺損跼部基因治療研究奠定基礎.
목적:구건골형태발생단백7(BMP-7)화록색형광단백(GFP)융합기인적중조선병독재체,병검측기재골수기질간세포(BMSCs)적표체.방법:RT-PCR법획득BMP-7기인.장기극륭지pcDNA3.1/CT-GFP질립중,PCR확증hBMP-7/GFP융합기인편단,여선성화pAxCAwt선병독재체련접,전염대장간균LE392,사선중조선병독점립,대량확증후여DNA-TPC공전HEK293세포,획득중조선병독Ad.hBMP-7/GFP.용중조병독액전염토BMSCs세포,면역조화방법검측BMP-7적표체.결과:경과다취매련반응급매절감정증명획득료BMP-7중조선병독기인조,병포장출중조선병독,적도위4.4×108pfu/ml.형광현미경화면역조직화학증명BMP-7재중조선병독전염후적BMSC세포중득도료표체.결론:성공제비BMP-7중조선병독,위골결손국부기인치료연구전정기출.
