CAJ | 학술논문

分离不同性别的鸡胚性分化早期差异表达基因,可为禽类性别决定和性分化机制研究提供基本信息.本研究分别以孵化3.5-6 d的雌、雄鸡胚性腺为材料,利用抑制性消减杂交技术成功构建了雌-雄鸡胚间正、反向消减cDNA文库,并利用斑点印迹杂交从中筛选出了39个性别差异表达的阳性cDNA克隆.以持家基因GAPDH为参照指标检测消减文库的消减效率,结果发现两个文库的消减效率均高达25倍.插入片段PCR鉴定结果显示,消减文库中cDNA插入片段的长度主要分布于250-750 bp之间.分别对雌、雄鸡胚消减文库中的252和168个cDNA克隆进行斑点杂交筛选,再随机从两个消减文库中共抽取39个阳性差异表达克隆进行序列测定及序列比对分析.结果表明:这39个cDNA克隆分别代表了定位于鸡不同染色体上的18个已知功能的基因和11个假定基因;参照哺乳动物同源基因的功能,所得的18个已知差异基因可能参与多种生物反应过程.用半定量RT-PCR方法对雌、雄鸡胚消减文库中各5个基因的表达情况进行进一步验证,发现除雌性库中的一个基因外其它9个基因均有较明显的性别差异表达.这些性别差异表达基因的获得为进一步研究鸡胚性腺发育中的基因表达调控奠定了基础[动物学报 53(2):315-324,2007].
분리불동성별적계배성분화조기차이표체기인,가위금류성별결정화성분화궤제연구제공기본신식.본연구분별이부화3.5-6 d적자、웅계배성선위재료,이용억제성소감잡교기술성공구건료자-웅계배간정、반향소감cDNA문고,병이용반점인적잡교종중사선출료39개성별차이표체적양성cDNA극륭.이지가기인GAPDH위삼조지표검측소감문고적소감효솔,결과발현량개문고적소감효솔균고체25배.삽입편단PCR감정결과현시,소감문고중cDNA삽입편단적장도주요분포우250-750 bp지간.분별대자、웅계배소감문고중적252화168개cDNA극륭진행반점잡교사선,재수궤종량개소감문고중공추취39개양성차이표체극륭진행서렬측정급서렬비대분석.결과표명:저39개cDNA극륭분별대표료정위우계불동염색체상적18개이지공능적기인화11개가정기인;삼조포유동물동원기인적공능,소득적18개이지차이기인가능삼여다충생물반응과정.용반정량RT-PCR방법대자、웅계배소감문고중각5개기인적표체정황진행진일보험증,발현제자성고중적일개기인외기타9개기인균유교명현적성별차이표체.저사성별차이표체기인적획득위진일보연구계배성선발육중적기인표체조공전정료기출[동물학보 53(2):315-324,2007].