高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2007年
2期
175-179
,共5页
脂肪酶基因%克隆%高效表达%P.cepacia G63
脂肪酶基因%剋隆%高效錶達%P.cepacia G63
지방매기인%극륭%고효표체%P.cepacia G63
从油污土壤中筛选到一株脂肪酶活性较高的洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)G63.运用PCR的方法从该菌株中克隆了脂肪酶基因(lipA)及其伴侣基因(lipB).该脂肪酶基因开放式阅读框(ORF)为1092bp,编码364个氨基酸残基.经KpnⅠ/HindⅢ酶切,将其克隆到广泛宿主质粒pBBR1Tp载体上,构建成质粒pBBR1-lipAB.通过三亲杂交,在辅助质粒pRK2013的帮助下,转入原宿主菌P.cepacia G63中,构建成lipA基因同源高效表达的基因工程菌.该菌株在连续转接5次,培养45h后质粒保持率为82.6%,适用于规模化发酵生产.摇床发酵表明,工程菌在60h时酶活达到150.63 U/mL,较原始菌株提高3.6倍.
從油汙土壤中篩選到一株脂肪酶活性較高的洋蔥假單胞菌(Pseudomonas cepacia)G63.運用PCR的方法從該菌株中剋隆瞭脂肪酶基因(lipA)及其伴侶基因(lipB).該脂肪酶基因開放式閱讀框(ORF)為1092bp,編碼364箇氨基痠殘基.經KpnⅠ/HindⅢ酶切,將其剋隆到廣汎宿主質粒pBBR1Tp載體上,構建成質粒pBBR1-lipAB.通過三親雜交,在輔助質粒pRK2013的幫助下,轉入原宿主菌P.cepacia G63中,構建成lipA基因同源高效錶達的基因工程菌.該菌株在連續轉接5次,培養45h後質粒保持率為82.6%,適用于規模化髮酵生產.搖床髮酵錶明,工程菌在60h時酶活達到150.63 U/mL,較原始菌株提高3.6倍.
종유오토양중사선도일주지방매활성교고적양총가단포균(Pseudomonas cepacia)G63.운용PCR적방법종해균주중극륭료지방매기인(lipA)급기반려기인(lipB).해지방매기인개방식열독광(ORF)위1092bp,편마364개안기산잔기.경KpnⅠ/HindⅢ매절,장기극륭도엄범숙주질립pBBR1Tp재체상,구건성질립pBBR1-lipAB.통과삼친잡교,재보조질립pRK2013적방조하,전입원숙주균P.cepacia G63중,구건성lipA기인동원고효표체적기인공정균.해균주재련속전접5차,배양45h후질립보지솔위82.6%,괄용우규모화발효생산.요상발효표명,공정균재60h시매활체도150.63 U/mL,교원시균주제고3.6배.
