CAJ | 학술논문

BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力.有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀.为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建了具有TRX、GST、MBP、CBD融合标签和His6标签的rhBMP6成熟肽原核表达载体,调节诱导温度和IPTG浓度,比较不同融合标签和诱导条件对目的蛋白表达量和溶解性的影响.结果表明,MBP最能有效的增强rhBMP6的溶解性,诱导条件对溶解性影响较小.大肠杆菌BL21 trxB(DE3)这种硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株为rhBMP6二硫键在胞质中形成提供了合适的氧化还原环境.MBP和BL21 trxB(DE3)相结合在细胞质中高效可溶表达出了BMP6融合蛋白二聚体.表达产物经亲和层析和凝胶排阻层析纯化后,能诱导成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化.
BMP6시일충조절성골세포화성연골세포분화적골유도인자,재수복각충골결손방면구유흔호적응용잠력.유유골활성적BMP6시다이류건적이취체단백,소수성겁강용역취집침정.위료재대장간균중가용표체구유생물활성적중조인BMP6(rhBMP6),구건료구유TRX、GST、MBP、CBD융합표첨화His6표첨적rhBMP6성숙태원핵표체재체,조절유도온도화IPTG농도,비교불동융합표첨화유도조건대목적단백표체량화용해성적영향.결과표명,MBP최능유효적증강rhBMP6적용해성,유도조건대용해성영향교소.대장간균BL21 trxB(DE3)저충류양환단백환원매결함균주위rhBMP6이류건재포질중형성제공료합괄적양화환원배경.MBP화BL21 trxB(DE3)상결합재세포질중고효가용표체출료BMP6융합단백이취체.표체산물경친화층석화응효배조층석순화후,능유도성기세포계C2C12향성골세포방향전화.