中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
1期
21-24
,共4页
王阳阳%刘淼%朱绍春%任翠平%沈际佳
王暘暘%劉淼%硃紹春%任翠平%瀋際佳
왕양양%류묘%주소춘%임취평%침제가
日本血吸虫%膜蛋白%四跨膜超家族蛋白%基因%抗原性
日本血吸蟲%膜蛋白%四跨膜超傢族蛋白%基因%抗原性
일본혈흡충%막단백%사과막초가족단백%기인%항원성
目的 扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(sjTsp2-A)基因SjTsp2.方法 根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmTsp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的 蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli) BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,EUSA检测其血清抗体效价,蛋白质印迹(Westem blottinK}分析鉴定其免疫反应性.结果 PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为228 bp,与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为52%.SjTsp2基因亚克隆人pET28a并可溶性表达,免疫小鼠可产生高滴度(最高1:32 000)特异性抗体.Westem bloning分析结果表明,纯化的SiTsp2.A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应. 结论 日本血吸虫表膜蛋白基因SjTspp2在体外获得表达,其表达蛋白具有一定的抗原性.
目的 擴增併錶達日本血吸蟲錶膜蛋白(sjTsp2-A)基因SjTsp2.方法 根據與曼氏血吸蟲錶膜蛋白SmTsp2基因同源的SjTsp2序列(編號為AY810722)設計引物,體外擴增目的 蛋白基因,併將其亞剋隆入原覈錶達載體pET28a,轉化至大腸埃希菌(E.coli) BL21株,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)進行誘導錶達,用純化的重組蛋白免疫小鼠,EUSA檢測其血清抗體效價,蛋白質印跡(Westem blottinK}分析鑒定其免疫反應性.結果 PCR擴增穫得SjTsp2基因大環覈苷痠序列為228 bp,與曼氏血吸蟲錶膜蛋白(SmTsp2)的氨基痠序列同源性為52%.SjTsp2基因亞剋隆人pET28a併可溶性錶達,免疫小鼠可產生高滴度(最高1:32 000)特異性抗體.Westem bloning分析結果錶明,純化的SiTsp2.A蛋白能被疫區居民血吸蟲抗體暘性者血清、急性及慢性血吸蟲病患者血清識彆,與健康人血清無反應. 結論 日本血吸蟲錶膜蛋白基因SjTspp2在體外穫得錶達,其錶達蛋白具有一定的抗原性.
목적 확증병표체일본혈흡충표막단백(sjTsp2-A)기인SjTsp2.방법 근거여만씨혈흡충표막단백SmTsp2기인동원적SjTsp2서렬(편호위AY810722)설계인물,체외확증목적 단백기인,병장기아극륭입원핵표체재체pET28a,전화지대장애희균(E.coli) BL21주,이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)진행유도표체,용순화적중조단백면역소서,EUSA검측기혈청항체효개,단백질인적(Westem blottinK}분석감정기면역반응성.결과 PCR확증획득SjTsp2기인대배핵감산서렬위228 bp,여만씨혈흡충표막단백(SmTsp2)적안기산서렬동원성위52%.SjTsp2기인아극륭인pET28a병가용성표체,면역소서가산생고적도(최고1:32 000)특이성항체.Westem bloning분석결과표명,순화적SiTsp2.A단백능피역구거민혈흡충항체양성자혈청、급성급만성혈흡충병환자혈청식별,여건강인혈청무반응. 결론 일본혈흡충표막단백기인SjTspp2재체외획득표체,기표체단백구유일정적항원성.
