中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
2期
120-124
,共5页
王晓楠%雷黎%赵志荣%朱绍春%刘淼%沈际佳
王曉楠%雷黎%趙誌榮%硃紹春%劉淼%瀋際佳
왕효남%뢰려%조지영%주소춘%류묘%침제가
日本血吸虫%Tsunagi%克隆%基因表达%多克隆抗体
日本血吸蟲%Tsunagi%剋隆%基因錶達%多剋隆抗體
일본혈흡충%Tsunagi%극륭%기인표체%다극륭항체
目的 获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的cDNA序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法 应用简并引物PCR和5'端、3'端锚定PCR,扩增得到日本血吸虫Tsunagi基因的完整开放阅读框(Open reading frame, ORF).将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用ELISA和Western Blotting对表达蛋白进行初步鉴定.结果 获得日本血吸虫Tsunagi蛋白基因的完整ORF,序列全长为531bp,编码177个氨基酸.构建的重组质粒pET28a-SjTsunagi在大肠杆菌中获得了可溶性表达;以重组蛋白免疫小鼠获得效价为1∶51 200的多克隆抗体,Western Blotting证实抗体可特异性识别目的 蛋白.结论 成功获得日本血吸虫Tsunagi蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了Tsunagi基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础.
目的 穫得日本血吸蟲Tsunagi蛋白基因的cDNA序列,剋隆、錶達和純化原覈蛋白併初步鑒定.方法 應用簡併引物PCR和5'耑、3'耑錨定PCR,擴增得到日本血吸蟲Tsunagi基因的完整開放閱讀框(Open reading frame, ORF).將該基因亞剋隆入原覈錶達載體pET28a(+),誘導錶達併純化融閤蛋白.用純化後的蛋白免疫小鼠,製備該蛋白的多剋隆抗體,分彆用ELISA和Western Blotting對錶達蛋白進行初步鑒定.結果 穫得日本血吸蟲Tsunagi蛋白基因的完整ORF,序列全長為531bp,編碼177箇氨基痠.構建的重組質粒pET28a-SjTsunagi在大腸桿菌中穫得瞭可溶性錶達;以重組蛋白免疫小鼠穫得效價為1∶51 200的多剋隆抗體,Western Blotting證實抗體可特異性識彆目的 蛋白.結論 成功穫得日本血吸蟲Tsunagi蛋白編碼基因的全長ORF,在大腸桿菌中剋隆錶達瞭Tsunagi基因,併製備瞭特異性多剋隆抗體,為進一步研究其在日本血吸蟲生殖生物學中的功能奠定瞭基礎.
목적 획득일본혈흡충Tsunagi단백기인적cDNA서렬,극륭、표체화순화원핵단백병초보감정.방법 응용간병인물PCR화5'단、3'단묘정PCR,확증득도일본혈흡충Tsunagi기인적완정개방열독광(Open reading frame, ORF).장해기인아극륭입원핵표체재체pET28a(+),유도표체병순화융합단백.용순화후적단백면역소서,제비해단백적다극륭항체,분별용ELISA화Western Blotting대표체단백진행초보감정.결과 획득일본혈흡충Tsunagi단백기인적완정ORF,서렬전장위531bp,편마177개안기산.구건적중조질립pET28a-SjTsunagi재대장간균중획득료가용성표체;이중조단백면역소서획득효개위1∶51 200적다극륭항체,Western Blotting증실항체가특이성식별목적 단백.결론 성공획득일본혈흡충Tsunagi단백편마기인적전장ORF,재대장간균중극륭표체료Tsunagi기인,병제비료특이성다극륭항체,위진일보연구기재일본혈흡충생식생물학중적공능전정료기출.
