细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
7期
654-656
,共3页
尹辉%龚权%杨衡%熊平%郑芳%龚非力
尹輝%龔權%楊衡%熊平%鄭芳%龔非力
윤휘%공권%양형%웅평%정방%공비력
小鼠sST2-Fc%真核表达%RAW264.7%TNF-α%IL-6
小鼠sST2-Fc%真覈錶達%RAW264.7%TNF-α%IL-6
소서sST2-Fc%진핵표체%RAW264.7%TNF-α%IL-6
目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgG Fc 融合基因的真核表达质粒, 初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响.方法:借助RT-PCR技术, 从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2 cDNA, 构建sST2与hIgG Fc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc).应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞, 经G418筛选, 获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株.细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后, 采用Western blot进行鉴定, 应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响.结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-Fc cDNA阅读框序列正确, Western blot 证实sST2-Fc融合蛋白的表达, sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6.结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达, sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应.
目的:剋隆併構建含小鼠sST2和人IgG Fc 融閤基因的真覈錶達質粒, 初步探討其錶達產物sST2-Fc融閤蛋白對LPS刺激小鼠巨噬細胞生物學活性的影響.方法:藉助RT-PCR技術, 從小鼠脾髒總RNA中擴增全長sST2 cDNA, 構建sST2與hIgG Fc段融閤基因的真覈錶達載體(psST2-Fc).應用脂質體將重組質粒psST2-Fc轉染CHO細胞, 經G418篩選, 穫得穩定錶達sST2-Fc融閤蛋白的CHO細胞株.細胞培養上清經蛋白A親和層析純化後, 採用Western blot進行鑒定, 應用FACS檢測sST2-Fc與RAW264.7巨噬細胞錶麵相應受體結閤情況;ELISA法檢測sST2-Fc對LPS刺激RAW264.7巨噬細胞分泌TNF-α和IL-6的影響.結果:測序證實剋隆和構建的小鼠sST2-Fc cDNA閱讀框序列正確, Western blot 證實sST2-Fc融閤蛋白的錶達, sST2-Fc抑製LPS誘導巨噬細胞分泌的炎性細胞因子TNF-α和IL-6.結論:成功構建sST2-Fc融閤基因併穫得穩定錶達, sST2-Fc通過與其特異性受體結閤可抑製巨噬細胞介導的炎性反應.
목적:극륭병구건함소서sST2화인IgG Fc 융합기인적진핵표체질립, 초보탐토기표체산물sST2-Fc융합단백대LPS자격소서거서세포생물학활성적영향.방법:차조RT-PCR기술, 종소서비장총RNA중확증전장sST2 cDNA, 구건sST2여hIgG Fc단융합기인적진핵표체재체(psST2-Fc).응용지질체장중조질립psST2-Fc전염CHO세포, 경G418사선, 획득은정표체sST2-Fc융합단백적CHO세포주.세포배양상청경단백A친화층석순화후, 채용Western blot진행감정, 응용FACS검측sST2-Fc여RAW264.7거서세포표면상응수체결합정황;ELISA법검측sST2-Fc대LPS자격RAW264.7거서세포분비TNF-α화IL-6적영향.결과:측서증실극륭화구건적소서sST2-Fc cDNA열독광서렬정학, Western blot 증실sST2-Fc융합단백적표체, sST2-Fc억제LPS유도거서세포분비적염성세포인자TNF-α화IL-6.결론:성공구건sST2-Fc융합기인병획득은정표체, sST2-Fc통과여기특이성수체결합가억제거서세포개도적염성반응.
