CAJ | 학술논문

目的探讨针对结缔组织生长因子(CTGF)基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响.方法将体外培养的HK-2细胞分为6组:(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4) 高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5) 高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6) 高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的 siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养.应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平.结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGF mRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平.而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA蛋白表达水平降低.结论 CTGF是高糖诱导HK-2细胞EMT的重要介质.针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据.
목적 탐토침대결체조직생장인자(CTGF)기인적siRNA대고당조건배양하적인신소관상피세포주HK-2세포향간충질세포전분화(EMT)적영향.방법 장체외배양적HK-2세포분위6조:(1)정상대조조,배양기함D-포도당1g/L;(2)등삼대조조,배양기함D-포도당1g/L,감로순3.5 g/L;(3)고당조,배양기함D-포도당4.5 g/L;(4) 고당+공백대조조:세포전염공백질립후우고당배양기중배양;(5) 고당+음성대조조:세포전염함무관서렬적중조질립후우고당배양기중배양;(6) 고당+간우조:세포전염침대CTGF적 siRNA표체질립후우고당배양기중배양.응용RT-PCR검측CTGF mRNA수평,Western blot법검측CTGF、E-개점단백(E-cadherin)、α-평활기기동단백(α-SMA)단백수평.결과 고당자격가상조HK-2세포적CTGF mRNA급단백수평,병정시간의뢰성강저HK-2세포적E-cadherin단백표체수평,승고α-SMA단백표체수평.이통과특이성siRNA억제CTGF mRNA표체후,세포적CTGF단백표체수시간연장진행성강저,동시반유세포E-cadherin단백표체승고,α-SMA단백표체수평강저.결론 CTGF시고당유도HK-2세포EMT적중요개질.침대CTGF적siRNA능명현개선고당유도적신소관상피세포EMT,위진일보심조DN방치적파점제공료신적실험의거.