CAJ | 학술논문

根据猪α1干扰素(pocine interferon-alphal,poIFN-α1)的全基因序列(EU364896)设计合成1对特异引物,通过RT-PCR从三元杂交仔猪外周血淋巴细胞扩增出poIFN-α1全基因,将该基因克隆到pGEM-T栽体,构建重组质粒pGEM-T-poIFN-α1,进行测序.以pGEM-T-poIFN-α1为模板,经PCR扩增带有酶切位点的poIFN-α1基因,将其定向克隆到原核表达栽体pGEX-6P-1中,构建重组表达裁体pGEX-6P-poIFNα1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达和鉴定,并确定蛋白最佳表达条件.序列分析表明,克隆的poIFN-α1基因全长546 bp,编码181个氨基酸,前23个氨基酸组成信号肽,无糖基化位点.SDS-PAGE和Western blotting证实重组表达菌经IPTG诱导后,可表达相对分子质量约46ku的融合蛋白(GST-poIFN-α1).当以1.0 mmol/L的IPTG于37℃下诱导表达9 h时,蛋白表达量最高.poIFN-α1基因的克隆与表达为进一步研究其抗病毒活性,开发病毒治疗和疫苗免疫增强用生物制剂奠定了基础.
근거저α1간우소(pocine interferon-alphal,poIFN-α1)적전기인서렬(EU364896)설계합성1대특이인물,통과RT-PCR종삼원잡교자저외주혈림파세포확증출poIFN-α1전기인,장해기인극륭도pGEM-T재체,구건중조질립pGEM-T-poIFN-α1,진행측서.이pGEM-T-poIFN-α1위모판,경PCR확증대유매절위점적poIFN-α1기인,장기정향극륭도원핵표체재체pGEX-6P-1중,구건중조표체재체pGEX-6P-poIFNα1,전화대장간균BL21(DE3)진행단백유도표체화감정,병학정단백최가표체조건.서렬분석표명,극륭적poIFN-α1기인전장546 bp,편마181개안기산,전23개안기산조성신호태,무당기화위점.SDS-PAGE화Western blotting증실중조표체균경IPTG유도후,가표체상대분자질량약46ku적융합단백(GST-poIFN-α1).당이1.0 mmol/L적IPTG우37℃하유도표체9 h시,단백표체량최고.poIFN-α1기인적극륭여표체위진일보연구기항병독활성,개발병독치료화역묘면역증강용생물제제전정료기출.