CAJ | 학술논문

为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439 bp,ORF为525 bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku.Real-time PCR对E.tenella不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段.另外.将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11.转化大肠杆茵BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6 h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7 ku大部分以可溶性存在.Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗E.tenella的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性.该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础.
위극륭화연구유눈애미이구충(E.tenella)신기인,본연구재소획득적ESTs서렬적기출상,응용RACE기술극륭획득료1개재자포자계단고표체신기인적전장cDNA서렬(GU553107),명명위ZB7-C11,해기인전장1439 bp,ORF위525 bp,편마174개안기산,예측표체단백적분자량약위18.7ku.Real-time PCR대E.tenella불동발육계단(미포자화란낭、포자화란낭、자포자화렬식자)표체량진행분석현시,해기인재자포자계단적표체고우기타계단.령외.장ZB7-C11극륭우pGEX-4T중구건중조질립pGEX-4T-C11.전화대장간인BL21(DE3)중,경IPTG유도표체6 h후기표체량최고,병차중조단백분자량약44.7 ku대부분이가용성존재.Westernblot분석현시해중조단백가피항E.tenella적다극륭항혈청식별,표명해단백구유교호적반응원성.해결과위진일보연구해기인적생물학공능전정료기출.