南京农业大学学报
南京農業大學學報
남경농업대학학보
JOURNAL OF NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
3期
31-36
,共6页
宋廷宇%侯喜林%吴春燕%何启伟%霍雨猛
宋廷宇%侯喜林%吳春燕%何啟偉%霍雨猛
송정우%후희림%오춘연%하계위%곽우맹
薹菜%CYP79B5%基因克隆%原核表达
薹菜%CYP79B5%基因剋隆%原覈錶達
대채%CYP79B5%기인극륭%원핵표체
以薹菜品种京研薹菜叶片cDNA为模板,采用RT-PCR技术,获得了编码薹菜CYP79B5基因全序列1 847 bp,包含有1 620 bp的开放阅读框,编码540个氨基酸.以薹菜基因组DNA为模板,获得了2 112 bp的目的片段.经比对发现其氨基酸序列与油菜、白芥、拟南芥等CYP79B5编码的氨基酸序列具有较高同源性,与油菜同源性达100%.经过生物信息学分析,发现所推导的氨基酸序列具有明显的CYP蛋白信号域,且可以在SWISS-MODEL数据库中搜索到与之相近的三维结构.扩增CYP79B5完整的编码区序列,构建pET-24α(+)重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导融合蛋白高效表达,SDS-PAGE电泳检测发现在相对分子质量64 000处有一特异条带,与预期的目的产物蛋白带大小一致.
以薹菜品種京研薹菜葉片cDNA為模闆,採用RT-PCR技術,穫得瞭編碼薹菜CYP79B5基因全序列1 847 bp,包含有1 620 bp的開放閱讀框,編碼540箇氨基痠.以薹菜基因組DNA為模闆,穫得瞭2 112 bp的目的片段.經比對髮現其氨基痠序列與油菜、白芥、擬南芥等CYP79B5編碼的氨基痠序列具有較高同源性,與油菜同源性達100%.經過生物信息學分析,髮現所推導的氨基痠序列具有明顯的CYP蛋白信號域,且可以在SWISS-MODEL數據庫中搜索到與之相近的三維結構.擴增CYP79B5完整的編碼區序列,構建pET-24α(+)重組質粒轉化大腸桿菌Rosetta(DE3),IPTG誘導融閤蛋白高效錶達,SDS-PAGE電泳檢測髮現在相對分子質量64 000處有一特異條帶,與預期的目的產物蛋白帶大小一緻.
이대채품충경연대채협편cDNA위모판,채용RT-PCR기술,획득료편마대채CYP79B5기인전서렬1 847 bp,포함유1 620 bp적개방열독광,편마540개안기산.이대채기인조DNA위모판,획득료2 112 bp적목적편단.경비대발현기안기산서렬여유채、백개、의남개등CYP79B5편마적안기산서렬구유교고동원성,여유채동원성체100%.경과생물신식학분석,발현소추도적안기산서렬구유명현적CYP단백신호역,차가이재SWISS-MODEL수거고중수색도여지상근적삼유결구.확증CYP79B5완정적편마구서렬,구건pET-24α(+)중조질립전화대장간균Rosetta(DE3),IPTG유도융합단백고효표체,SDS-PAGE전영검측발현재상대분자질량64 000처유일특이조대,여예기적목적산물단백대대소일치.
