军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2011年
4期
272-277
,共6页
张静%王思涵%杨印祥%姚海雷%陈琳%吕洋%南雪%岳文%李艳华%裴雪涛
張靜%王思涵%楊印祥%姚海雷%陳琳%呂洋%南雪%嶽文%李豔華%裴雪濤
장정%왕사함%양인상%요해뢰%진림%려양%남설%악문%리염화%배설도
可卡因-苯丙胺调节转录肽%内含子%转录调控%神经元限制性沉默因子%神经元限制性沉默元件
可卡因-苯丙胺調節轉錄肽%內含子%轉錄調控%神經元限製性沉默因子%神經元限製性沉默元件
가잡인-분병알조절전록태%내함자%전록조공%신경원한제성침묵인자%신경원한제성침묵원건
目的 研究内含子序列对可卡因-苯丙胺调节转录肤(cocaine-and amphetamine-regulated transcript.CART)基因转录水平的调控作用.方法 分别以HeLa细胞和人源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因组DNA为模板,PCR扩增CART内含子Ⅰ(Intron)、CART截短内含子Ⅰ(去除NRSE基序,NBSEnon Intron)序列,克隆入载体 pGL3-Basic-CART32,构建pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron 荧光素酶报告载体.经质粒酶切和DNA测序进行鉴定.将报告载体瞬时转染入NT2/CloneD1细胞系,进行荧光素酶活性的分析.取1×107NT2/CloneD1细胞,采用抗NRSF和抗IgG抗体进行染色质免疫共沉淀,分析NRSF与CART内含子区NRSE的体内结合情况.结果 构建的pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron报告载体经酶切和测序鉴定正确.pGL3-Basic-CART32-Intren荧光素酶活性相对pGL3-Basic-CART32下调57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NBSEnon Intron相对pGL3-Basic-CART32-Intron上调53.8%(P<0.05).在NT2/CloneD1细胞中,CART内含子区NRSE调控元件能与NRSF蛋白结合.结论 研究结果表明,CART内含子序列对CART基因转录发挥负调控作用,内含子中的NRSE序列参与介导了其时CART基因的转录负调控作用.
目的 研究內含子序列對可卡因-苯丙胺調節轉錄膚(cocaine-and amphetamine-regulated transcript.CART)基因轉錄水平的調控作用.方法 分彆以HeLa細胞和人源性間充質榦細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因組DNA為模闆,PCR擴增CART內含子Ⅰ(Intron)、CART截短內含子Ⅰ(去除NRSE基序,NBSEnon Intron)序列,剋隆入載體 pGL3-Basic-CART32,構建pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron 熒光素酶報告載體.經質粒酶切和DNA測序進行鑒定.將報告載體瞬時轉染入NT2/CloneD1細胞繫,進行熒光素酶活性的分析.取1×107NT2/CloneD1細胞,採用抗NRSF和抗IgG抗體進行染色質免疫共沉澱,分析NRSF與CART內含子區NRSE的體內結閤情況.結果 構建的pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron報告載體經酶切和測序鑒定正確.pGL3-Basic-CART32-Intren熒光素酶活性相對pGL3-Basic-CART32下調57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NBSEnon Intron相對pGL3-Basic-CART32-Intron上調53.8%(P<0.05).在NT2/CloneD1細胞中,CART內含子區NRSE調控元件能與NRSF蛋白結閤.結論 研究結果錶明,CART內含子序列對CART基因轉錄髮揮負調控作用,內含子中的NRSE序列參與介導瞭其時CART基因的轉錄負調控作用.
목적 연구내함자서렬대가잡인-분병알조절전록부(cocaine-and amphetamine-regulated transcript.CART)기인전록수평적조공작용.방법 분별이HeLa세포화인원성간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSCs)적기인조DNA위모판,PCR확증CART내함자Ⅰ(Intron)、CART절단내함자Ⅰ(거제NRSE기서,NBSEnon Intron)서렬,극륭입재체 pGL3-Basic-CART32,구건pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron 형광소매보고재체.경질립매절화DNA측서진행감정.장보고재체순시전염입NT2/CloneD1세포계,진행형광소매활성적분석.취1×107NT2/CloneD1세포,채용항NRSF화항IgG항체진행염색질면역공침정,분석NRSF여CART내함자구NRSE적체내결합정황.결과 구건적pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron보고재체경매절화측서감정정학.pGL3-Basic-CART32-Intren형광소매활성상대pGL3-Basic-CART32하조57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NBSEnon Intron상대pGL3-Basic-CART32-Intron상조53.8%(P<0.05).재NT2/CloneD1세포중,CART내함자구NRSE조공원건능여NRSF단백결합.결론 연구결과표명,CART내함자서렬대CART기인전록발휘부조공작용,내함자중적NRSE서렬삼여개도료기시CART기인적전록부조공작용.
