华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2012年
3期
293-297
,共5页
张文茂%彭楠%佘群新%葛向阳
張文茂%彭楠%佘群新%葛嚮暘
장문무%팽남%사군신%갈향양
古菌%硫化叶菌%超表达载体%Mre11蛋白%共纯化
古菌%硫化葉菌%超錶達載體%Mre11蛋白%共純化
고균%류화협균%초표체재체%Mre11단백%공순화
利用araS启动子并在穿梭载体pZC1及pEXA的基础上构建硫化叶菌超表达载体pZC2,成功超表达了带有C端6×His标签序列的DNA双链断裂修复蛋白Mre11,进一步采用共纯化法鉴定到Mre11蛋白的作用配体Rad50,确定上述蛋白在高浓度盐(500 mmol/L NaCl)中仍能形成MR复合体,表明该复合物在逆性条件下可能仍保持DNA断链修复的功能.进一步共纯化分析表明,基因组DNA片段是MR复合体形成的必需条件,在缺乏基因组DNA片段的情况下古菌分子伴侣蛋白结合并可能保护Mre11,该表达系统能够有效地应用于鉴定蛋白质的体内作用网络.
利用araS啟動子併在穿梭載體pZC1及pEXA的基礎上構建硫化葉菌超錶達載體pZC2,成功超錶達瞭帶有C耑6×His標籤序列的DNA雙鏈斷裂脩複蛋白Mre11,進一步採用共純化法鑒定到Mre11蛋白的作用配體Rad50,確定上述蛋白在高濃度鹽(500 mmol/L NaCl)中仍能形成MR複閤體,錶明該複閤物在逆性條件下可能仍保持DNA斷鏈脩複的功能.進一步共純化分析錶明,基因組DNA片段是MR複閤體形成的必需條件,在缺乏基因組DNA片段的情況下古菌分子伴侶蛋白結閤併可能保護Mre11,該錶達繫統能夠有效地應用于鑒定蛋白質的體內作用網絡.
이용araS계동자병재천사재체pZC1급pEXA적기출상구건류화협균초표체재체pZC2,성공초표체료대유C단6×His표첨서렬적DNA쌍련단렬수복단백Mre11,진일보채용공순화법감정도Mre11단백적작용배체Rad50,학정상술단백재고농도염(500 mmol/L NaCl)중잉능형성MR복합체,표명해복합물재역성조건하가능잉보지DNA단련수복적공능.진일보공순화분석표명,기인조DNA편단시MR복합체형성적필수조건,재결핍기인조DNA편단적정황하고균분자반려단백결합병가능보호Mre11,해표체계통능구유효지응용우감정단백질적체내작용망락.